巢式聚合酶链式反应检测布鲁氏菌核酸DNA方法的建立

发布时间：2021-10-18 19:23

　　目的建立一种具有灵敏性高,特异性强的巢式聚合酶链式反应（PCR）方法检测血液标本中布鲁氏菌核酸DNA。方法使用细菌基因组提取试剂盒提取纯菌核酸DNA;使用血液等组织基因组核酸DNA提取试剂盒提取血液标本核酸DNA,对提取的核酸DNA先行常规PCR预扩增,以扩增的PCR产物为模板进行荧光定量PCR第二次扩增（即巢式PCR）。对纯菌提取的核酸DNA进行灵敏度和和特异性测试,构建巢式PCR的Ct值与核酸DNA拷贝数之关系曲线;检测临床血液标本核酸DNA,同时比较常规两种PCR方法检测结果。结果常规PCR检测的灵敏度为512个核酸DNA拷贝数;巢氏PCR检测有效范围为921.6 ng/μl～6.8 fg/μl,对应的Ct值为12.04～37.50,其指数关系为:y=(e^-0.695x)×10¹²;R²=0.998 6,巢式PCR扩增效率为2.28×10⁹倍,检测限为2个布鲁氏核酸DNA拷贝数。巢式PCR的灵敏度为91.67%,特异度为93.10%,阳性预测值为91.67%,阴性预测值为93.10%。对一起羊... 

【文章来源】：疾病监测. 2020,35(03)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

荧光定量PCR测得Ct值与DNA拷贝数之指数关系曲线Figure1IndexrelationshipcurveofDNAcopynumbersandCtvaluebythefluorescencequantitativePCR

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3443358