斑马鱼Jak2a基因的克

发布时间：2021-10-20 20:15

　　目的对斑马鱼的pGM-T-jak2a wt进行定点突变,完成pGM-T-jak2AV581F全长载体的构建,运用T7RNA聚合酶对含有jak2a基因的ORF区进行体外转录,在体外合成5端带有帽子结构的jak2a mRNA分子,为后续探讨斑马鱼MPD（Myeloproliferative disorders）模型的Jak/Stat信号通路奠定基础。方法根据jak2a基因GeneBank NM₁31093序列V581F突变位点的上下游序列片段设计引物,以pGM-T-jak2wt质粒载体为模板进行PCR后,用Dpn I酶对PCR扩增产物进行酶切消化去除模板,然后转化DH-5α感受态细菌,通过蓝白筛选酶切对阳性菌落进行鉴定,小量提取质粒,NdeI限制性内切酶完成pGM-T-jak2a质粒的线性化,运用T7RNA聚合酶对jak2a基因进行体外转录及加帽。最后经凝胶电泳对目的片段进行鉴定。结果完成PGM-T-jak2a V581F的定点突变,成功构建PGM-T-jak2a V581F载体,DNA序列分析的结果与GenBank上的序列（NM₁31093）一... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

克隆载体pGM-T图谱

斑马鱼Jak2a基因编码区酶切位点图谱(通过NEB获得）

华中科技大学博士学位论文giI197097629|reflNM_001132128. GAAATCCTCCTTTCATCAAACTTAGTGATCCTGGCArTAGTATTACAGTT 2302gi|3B8454211|re￡|NM_001265901. SAAATCCTCCTTTCATCAAACTTAGTGATCCTCJGCATTAGTATTACAGTT 2619gi12285795IdtojIAB006011.il gaaatcctcccttcatcaaacttagtqatcctcxkzatcagtattacagtt 2434gi1139286951ref|NM_031514.1i oeAATCCACCTTTCATCAAACTTAGTGATCCTGGGATTAGCATCACAGTT 2274gi I 37590525 I 典 IBC0S9834.11 GGAACCCACCTTTCATCAAACTTAGTGATCCTGGCATTAGCATTACAGTT 2222gi |71896484Iref INM_00103053e.l SAAACCTTCCTTTTAXAAAACTAAGTGACCCTGGCATCAGTATCACAGTT 2301gi 1188509161 ref | NK_131093.11 GGACACCACCCTTCATCAASCTGAGCG3VCCCGGGCATCAGCATCACCSTC 2199图lA斑马鱼Jak2aDNA序列与人、小鼠、大鼠等进行序列比对*


本文编号：3447536