人体血红蛋白糖基化过程对其结构影响的机理研究
发布时间：2021-10-20 18:47
糖化血红蛋白（HemoglobinAic,HbAic）作为一种典型的糖基化蛋白,其含量作为糖尿病的早期诊断和监控指标,具有重要的临床应用价值。另外,HbA1c的含量与糖尿病并发症的发生发展有着密切联系。糖基化会导致血红蛋白（Hemoglobin,Hb）结构的改变,从而引起一系列生化效应,最终影响Hb的正常输氧功能。因此本论文以正常成人、糖尿病人和体外糖化的Hb、HbA1c与HbA0为研究对象,结合色谱学、光谱学和质谱学等方法,分析糖基化导致的结构性质变化,为了揭示糖基化造成的功能性障碍和相关药物设计提供信息。首先,通过正交实验得到了影响体外糖基化Hb降解的主次因素。然后利用离子交换层析柱和硼酸亲和层析柱对正常成人、糖尿病人和体外糖化的Hb进行HbA1c和HbA0的分离提纯。分离提纯过程的吸收光谱、高效液相色谱表明,分离提纯的蛋白为二聚体结构,并且糖基化程度越高的Hb,造成Hb被糖基化的位点数量就越多。HbA1c:和HbA0蛋白的质谱表明,HbA1c的β亚基相对于HbA0的相对分子质量大162 Da,表明HbA1c的β亚基带有一个糖基。最后,对Hb、HbA1c和HbA0进行非变性凝胶电泳...
【文章来源】：南京理工大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．２非酶促糖化血红蛋白形成过程??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｎｏｎ?－?ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ?ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ??
（Ａ）?ｉｓ?ｅｘｐａｎｄｅｄ?ｆｕｒｔｈｅｒ?ｔｏ?ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ?ｔｈｅ?ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，?ａｎｄ?Ｂ，?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｌｕｔｉｏｎ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?ｂｙ?ＨＰＬＣ，?ｔｈｅ??ｇｒａｐｈ?ｉｎｓｅｔ?ｉｎ?（Ｂ）?ｉｓ?ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＨｂＡｉｃ?ｔｏ?ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ?ｔｈｅ?ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．??由图２．３可以看出，糖尿病人Ｈｂ经离子交换柱表现与正常成人Ｈｂ相似，主要区别??于２５％?Ｂ洗脱峰吸收较高，符合于样品为糖尿病人Ｈｂ，含有较高含量的ＨｂＡｌｃ。在实??际实验中
以此得到大量的ＨｂＡｉｃ。??用于体外糖基化的样品有经初步分离的正常成人Ｈｂ，还有经离子交换层析精分离??的ＨｂＡ。。其分离纯化结果对应如下图２．４－２．５图：??２０??４１５ｎｍ??＊＊?＼??４０５?ｎｍ??Ａ．?２８０?ｎｍ??１６?■?Ａｂｓ??ｒｘ２５??８?＇?０?２００?４００?６００??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）?Ｉ??４．?Ｖ＼??０?２００?４００?６００?８００??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??１２５?１?Ｒ?ｉ〇〇?＾?ＨｂＡ１ｃ?ｐｂＡ０?—?３４??０ｓ＊?Ａ１－１Ｉ—?ａ?５－６??１００?■?￡ｃｎ?７－１１??＜５０?■?１２??＂〇?Ｉ??１３??３?７５?．?＾?????ｍｓ??＜?０?１０?２０??１６??Ｅ?．?Ｆｒａｃｔｉｏｎ?ｎｕｍｂｅｒ?ｌ＼?１７－１８??２５．?ｋ?＼?二??０?１?２?３?４?５?６??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??图２．４体外糖基化Ｈｂ的离子交换层析柱分离的效果图??（Ａ，紫外可见光吸收光谱图；Ｂ，?Ｔｈｅｒｍｏ高效液相色谱图）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｃａｔｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｗｉｔｈ?ＵＶ－ＶＩＳ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｌｙｃａｔｅｄ?ｎｏｎｎａｌ?Ｈｂ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ．?Ａ，??ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｂｙ?ＵＶ－ＶＩＳ?（ａｔ?４１５?ｎｍ
【参考文献】：
期刊论文
[1]糖化血红蛋白标准化及其检测技术的发展[J]. 周文娟,吴云翔,易军. 生物化学与生物物理进展. 2015(05)
[2]同步辐射中的蛋白质结构和功能研究[J]. 董宇辉. 现代物理知识. 2014(05)
[3]预测蛋白质可结晶性研究进展[J]. 周仁斌,卢慧甍,尹大川. 生物工程学报. 2014(09)
[4]晚期糖化终末产物受体基因多态性与糖尿病动脉硬化关系的研究进展[J]. 叶静思,李希圣,林夏鸿. 医学综述. 2013(22)
[5]光谱法研究尿素对水溶液中血红蛋白构象的影响[J]. 马林,魏志强,黄爱民,杨华,何维仁,林瑞森. 物理化学学报. 2009(09)
[6]血红蛋白A1C的基本特性研究[J]. 杨锦云,王保宁,孟延发. 四川大学学报(自然科学版). 2008(04)
[7]分子生物学在蛋白质结晶中的应用[J]. 袁彩,刘钐,黄明东. 生物化学与生物物理进展. 2005(02)
[8]同步辐射在生物大分子结构研究中的应用[J]. 杨瑞瑛,刘鹏. 现代仪器. 2004(06)
[9]蛋白质晶体中的分子堆砌与晶体生长[J]. 陈世芝. 生物化学与生物物理进展. 1990(06)
博士论文
[1]几种不同基质硼酸亲和整体柱的制备及其在糖蛋白分离富集中的应用[D]. 杨帆.南开大学 2013
本文编号：3447415
【文章来源】：南京理工大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．２非酶促糖化血红蛋白形成过程??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｎｏｎ?－?ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ?ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ??
（Ａ）?ｉｓ?ｅｘｐａｎｄｅｄ?ｆｕｒｔｈｅｒ?ｔｏ?ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ?ｔｈｅ?ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，?ａｎｄ?Ｂ，?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｌｕｔｉｏｎ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?ｂｙ?ＨＰＬＣ，?ｔｈｅ??ｇｒａｐｈ?ｉｎｓｅｔ?ｉｎ?（Ｂ）?ｉｓ?ｔｈｅ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＨｂＡｉｃ?ｔｏ?ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ?ｔｈｅ?ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．??由图２．３可以看出，糖尿病人Ｈｂ经离子交换柱表现与正常成人Ｈｂ相似，主要区别??于２５％?Ｂ洗脱峰吸收较高，符合于样品为糖尿病人Ｈｂ，含有较高含量的ＨｂＡｌｃ。在实??际实验中
以此得到大量的ＨｂＡｉｃ。??用于体外糖基化的样品有经初步分离的正常成人Ｈｂ，还有经离子交换层析精分离??的ＨｂＡ。。其分离纯化结果对应如下图２．４－２．５图：??２０??４１５ｎｍ??＊＊?＼??４０５?ｎｍ??Ａ．?２８０?ｎｍ??１６?■?Ａｂｓ??ｒｘ２５??８?＇?０?２００?４００?６００??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）?Ｉ??４．?Ｖ＼??０?２００?４００?６００?８００??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??１２５?１?Ｒ?ｉ〇〇?＾?ＨｂＡ１ｃ?ｐｂＡ０?—?３４??０ｓ＊?Ａ１－１Ｉ—?ａ?５－６??１００?■?￡ｃｎ?７－１１??＜５０?■?１２??＂〇?Ｉ??１３??３?７５?．?＾?????ｍｓ??＜?０?１０?２０??１６??Ｅ?．?Ｆｒａｃｔｉｏｎ?ｎｕｍｂｅｒ?ｌ＼?１７－１８??２５．?ｋ?＼?二??０?１?２?３?４?５?６??Ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??图２．４体外糖基化Ｈｂ的离子交换层析柱分离的效果图??（Ａ，紫外可见光吸收光谱图；Ｂ，?Ｔｈｅｒｍｏ高效液相色谱图）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．４?Ｃａｔｉｏｎ?ｅｘｃｈａｎｇｅ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ?ｗｉｔｈ?ＵＶ－ＶＩＳ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｌｙｃａｔｅｄ?ｎｏｎｎａｌ?Ｈｂ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ．?Ａ，??ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｂｙ?ＵＶ－ＶＩＳ?（ａｔ?４１５?ｎｍ
【参考文献】：
期刊论文
[1]糖化血红蛋白标准化及其检测技术的发展[J]. 周文娟,吴云翔,易军. 生物化学与生物物理进展. 2015(05)
[2]同步辐射中的蛋白质结构和功能研究[J]. 董宇辉. 现代物理知识. 2014(05)
[3]预测蛋白质可结晶性研究进展[J]. 周仁斌,卢慧甍,尹大川. 生物工程学报. 2014(09)
[4]晚期糖化终末产物受体基因多态性与糖尿病动脉硬化关系的研究进展[J]. 叶静思,李希圣,林夏鸿. 医学综述. 2013(22)
[5]光谱法研究尿素对水溶液中血红蛋白构象的影响[J]. 马林,魏志强,黄爱民,杨华,何维仁,林瑞森. 物理化学学报. 2009(09)
[6]血红蛋白A1C的基本特性研究[J]. 杨锦云,王保宁,孟延发. 四川大学学报(自然科学版). 2008(04)
[7]分子生物学在蛋白质结晶中的应用[J]. 袁彩,刘钐,黄明东. 生物化学与生物物理进展. 2005(02)
[8]同步辐射在生物大分子结构研究中的应用[J]. 杨瑞瑛,刘鹏. 现代仪器. 2004(06)
[9]蛋白质晶体中的分子堆砌与晶体生长[J]. 陈世芝. 生物化学与生物物理进展. 1990(06)
博士论文
[1]几种不同基质硼酸亲和整体柱的制备及其在糖蛋白分离富集中的应用[D]. 杨帆.南开大学 2013
本文编号：3447415
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/3447415.html
最近更新
教材专著
