以烟草花叶病毒为载体的μE 3 单克隆抗体的制备及鉴定
发布时间：2021-10-23 22:50
目的:获得半抗原雌三醇（μE3）高特异性和高亲和力的单克隆抗体。方法:本研究利用烟草花叶病毒（TMV）作为抗原的载体,通过化学方法与半抗原雌三醇（μE3）连接形成TMV-EPMK-μE3复合体,利用该复合体免疫小鼠,再通过杂交瘤筛选技术来获得具有高亲和力的μE3单克隆抗体。结果:TMV-EPMK-μE3免疫的小鼠血清效价达到1∶100 000,通过细胞融合及筛选获得4株分泌抗体效价较高的杂交瘤细胞,然后进行了亚克隆,分别命名为TE1-1、TE2-1、TE3-1和TE 4-1。抗体的效价均在10-8左右,最低检测限约为1 ng。SDS-PAGE电泳结果显示4株抗体分别在25 kD和50 kD处各有一条清晰的条带,纯度都在95%以上。获得的4株抗体通过罗氏亚型鉴定试剂盒测定轻链类型均为κ;TE2-1和TE4-1单抗重链为IgG2a、 TE1-1和TE3-1单抗重链为IgG2b。TE1-1和TE3-1为TMV-EPMK-μE3的特异性抗体。...
【文章来源】：中国免疫学杂志. 2019,35(20)北大核心CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
TMV-EPMK-μE3第三次免疫小鼠后的效价Fig．1TiterafterthirdTMV-EPMK-μE3immunization
CPMV-μE3发生反应，而与TMV-EPMK-μE3和TMV-EPMK产生较强的抗原抗体反应，说明TE2-1和TE4-1是针对TMV-EPMK的抗体;TE1-1和TE3-1不与TMV-EPMK发生反应，而与TMV-EPMK-μE3和CPMV-μE3发生较强的抗原抗体反应，说明TE1-1和TE3-1不与载体产生交叉反应，是μE3的特异性抗体。图2TE1-1、TE2-1、TE3-1和TE4-1SDS-PAGE电泳图Fig．2SDS-PAGEofTE1-1，TE2-1，TE3-1andTE4-1Note:1.Marker;2.TE1-1;3.TE2-1;4.TE3-1;5.TE4-1.图3TMV-EPMK-μE34株单克隆抗体效价测定Fig．3TitrationELISAforanti-TMV-EPMK-μE3mAbs·1152·李旭等以烟草花叶病毒为载体的μE3单克隆抗体的制备及鉴定第20期
表2单克隆抗体的亚型鉴定Tab．2SubtypesidentificationofmonoclonalantibodiesNo.ThetypeoflightchainThetypeofheavychainTE1-1κIgG2bTE2-1κIgG2aTE3-1κIgG2bTE4-1κIgG2a图4TMV-EPMK-μE3免疫小鼠获得单克隆抗体的特异性分析Fig．4SpecificityanalysisofmAbsagainstTMV-EPMK-μE33讨论TMV有一个简单的由单个外壳蛋白缠绕的6.4kB(+)-单链ＲNA功能结构，其为ＲNA病毒，并且能够对其进行简单的基因操控。TMV能够使植物感染，但最近研究表明，通过基因改造或化学修饰后其可以应用于疫苗的研发中。在疫苗的研发中，抗原可以通过TMV作为载体递呈给抗原递呈细胞，进而刺激机体完成较强免疫应答［11］。μE3作为半抗原，不具备免疫原性，无法单独刺激机体并引起有效的免疫应答，把半抗原与通过化学方法或基因改造的分子载体(Proteincarrier)结合，使半抗原成为该蛋白质的一个或多个抗原决定簇，该半抗原就会获得免疫原性，并且能刺激机体产生相应的抗体［12-15］。在本实验中TMV作为半抗原μE3的载体，利用通过化学连接形成的TMV-EPMK-μE3复合体来免疫小鼠，再通过高效高通量单抗杂交瘤筛选技术获得了针对μE3的2株单克隆抗体，对抗体纯度、特性及抗原抗体反应性均作了分析，实验获得的高亲和力的针对μE3的单克隆抗体可以检测母体血液和尿液中的μE3浓度，从而判断胎儿的健康和发育状况，对能够引起胎儿畸形的爱德华氏综合征或唐氏综合征进行产前筛查［16］。通过本实验研究，半抗原μE3利用TMV作为载体，使其免疫原性获得了有效提高，能够刺激机体产生高效的免疫应答反应，对动?
本文编号：3454068
【文章来源】：中国免疫学杂志. 2019,35(20)北大核心CSCD
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
TMV-EPMK-μE3第三次免疫小鼠后的效价Fig．1TiterafterthirdTMV-EPMK-μE3immunization
CPMV-μE3发生反应，而与TMV-EPMK-μE3和TMV-EPMK产生较强的抗原抗体反应，说明TE2-1和TE4-1是针对TMV-EPMK的抗体;TE1-1和TE3-1不与TMV-EPMK发生反应，而与TMV-EPMK-μE3和CPMV-μE3发生较强的抗原抗体反应，说明TE1-1和TE3-1不与载体产生交叉反应，是μE3的特异性抗体。图2TE1-1、TE2-1、TE3-1和TE4-1SDS-PAGE电泳图Fig．2SDS-PAGEofTE1-1，TE2-1，TE3-1andTE4-1Note:1.Marker;2.TE1-1;3.TE2-1;4.TE3-1;5.TE4-1.图3TMV-EPMK-μE34株单克隆抗体效价测定Fig．3TitrationELISAforanti-TMV-EPMK-μE3mAbs·1152·李旭等以烟草花叶病毒为载体的μE3单克隆抗体的制备及鉴定第20期
表2单克隆抗体的亚型鉴定Tab．2SubtypesidentificationofmonoclonalantibodiesNo.ThetypeoflightchainThetypeofheavychainTE1-1κIgG2bTE2-1κIgG2aTE3-1κIgG2bTE4-1κIgG2a图4TMV-EPMK-μE3免疫小鼠获得单克隆抗体的特异性分析Fig．4SpecificityanalysisofmAbsagainstTMV-EPMK-μE33讨论TMV有一个简单的由单个外壳蛋白缠绕的6.4kB(+)-单链ＲNA功能结构，其为ＲNA病毒，并且能够对其进行简单的基因操控。TMV能够使植物感染，但最近研究表明，通过基因改造或化学修饰后其可以应用于疫苗的研发中。在疫苗的研发中，抗原可以通过TMV作为载体递呈给抗原递呈细胞，进而刺激机体完成较强免疫应答［11］。μE3作为半抗原，不具备免疫原性，无法单独刺激机体并引起有效的免疫应答，把半抗原与通过化学方法或基因改造的分子载体(Proteincarrier)结合，使半抗原成为该蛋白质的一个或多个抗原决定簇，该半抗原就会获得免疫原性，并且能刺激机体产生相应的抗体［12-15］。在本实验中TMV作为半抗原μE3的载体，利用通过化学连接形成的TMV-EPMK-μE3复合体来免疫小鼠，再通过高效高通量单抗杂交瘤筛选技术获得了针对μE3的2株单克隆抗体，对抗体纯度、特性及抗原抗体反应性均作了分析，实验获得的高亲和力的针对μE3的单克隆抗体可以检测母体血液和尿液中的μE3浓度，从而判断胎儿的健康和发育状况，对能够引起胎儿畸形的爱德华氏综合征或唐氏综合征进行产前筛查［16］。通过本实验研究，半抗原μE3利用TMV作为载体，使其免疫原性获得了有效提高，能够刺激机体产生高效的免疫应答反应，对动?
本文编号：3454068
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