一株致严重呼吸道疾病新的树鼩腺病毒分离鉴定及全基因组序列解析
发布时间：2021-10-23 11:04
树鼩腺病毒（Tree Shrew Adenovirus,TAV）是一种线性双链DNA病毒,属于腺病毒科,哺乳动物腺病毒属。腺病毒感染会引起急性上呼吸道感染、急性结膜炎、急性出血性膀胱炎、腹泻等疾病。树鼩（Tupaia belangeri）作为与灵长类动物亲缘关系最近的新型模式动物,与人类及灵长类动物较高的遗传同源性,在人类疾病模型尤其是感染性疾病模型和临床前药物开发研究中发挥着不可或缺的作用,已逐步成为生物医学研究的热点。前期开展的相关研究表明,野生来源树鼩中腺病毒核酸检测率较高,并有疑似病例发生,因此被列为该动物微生物质量控制的检测指标之一,但迄今国内还未见成功分离的报道。本研究从树鼩偶发呼吸道疾病及腹泻临床症状推测可能是由某种病毒感染引起,采用病毒分离方法首次从树鼩这一物种分离鉴定到树鼩腺病毒。为揭示这株TAV在腺病毒家族中所处的进化地位、遗传信息以及对树鼩健康是否存在潜在威胁,本研究对所获得的TAV进行了全基因组序列解析。首先,对来自患有严重呼吸道疾病的树鼩气管及肺组织样品进行病理学检测及样品处理,通过树鼩原代肾细胞（Tree Shrewkidney cells,TKC）培养,产...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３腺病毒复制周期简图??
中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生毕业论文??⑦将滤柱置于新的罔心管中，室温１２０００ｒｐｍ离心ｌｍｉｎ。??⑧将滤柱安置于新的１．５ｍＬ离心管中，在滤柱膜中央加入３０｜ｉＬ?ＤＥＰＣ水，??室温静置ｌｍｉｎ。室温１２０００ｒｐｍ离心ｌｍｉｎ洗脱ＤＮＡ。??纯化得到的ＤＮＡ产物由宝生物（大连）工程公司测序，测序结果于ＮＣＢ１??ＢＬＡＳＴ进行序列相似性和同源性分析，以确定ＰＣＲ检测的准确性。??２．实验结果??２．１树駒肺组织病理学病变特征观察??病毒性肺炎主要表现为肺间质的炎症。肉眼观，病变常不明显。病变区域呈??暗红色，肺体积增大（图４）。??
２．２树駒原代肾细胞ＴＫＣ和ＣＫ１８的鉴定??酶消化法所得肾细胞于１２ｈ贴壁，２４小时细胞从片断和团块周边贴壁生长，４８??小时细胞铺满瓶底，细胞呈扁平不规则多角形，鹅卵石样排列（图６）。传代后１２ｈ??细胞开始贴壁，２４小时完全贴壁。??＿??图６树駒原代肾细胞（１０〇ｘ）??Ｆｉｇ．６?Ｔｒｅｅ?ｓｈｒｅｗ?ｋｉｄｎｙ?ｃｅｌｌｓ?（１０〇ｘ）．??用优化的培养条件对分离得到的树駒原代肾细胞进行培养第４天，可在显微??２６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]树鼩腺病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 宋庆凯,李晓飞,苗雨润,张志成,王璇,袁圆,代解杰,孙晓梅. 中国比较医学杂志. 2018(03)
[2]牛病毒性腹泻病毒、牛传染性支气管炎病毒和口蹄疫病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 宋爽,赵柏林,曲萍,胡冬梅,孙雨,董浩,杨林,宋晓晖,潘树德. 中国预防兽医学报. 2017(02)
[3]山东省血清4型禽腺病毒的分离鉴定[J]. 于可响,黄兵,凌红丽,庞运倩,王友令,李峰,亓丽红,宋敏训. 中国动物传染病学报. 2016(05)
[4]Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及其致病性研究[J]. 李晓林,王相芹,罗济冠,李明义. 中国动物检疫. 2016(08)
[5]禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 万春和,陈翠腾,傅秋玲,程龙飞,傅光华,陈红梅,施少华,黄瑜. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(08)
[6]腺病毒感染研究进展[J]. 谢立,杨旭辉,陈恩富. 浙江预防医学. 2015(03)
[7]树鼩腺病毒（TAV）PCR方法的建立及初步应用[J]. 王淑菁,付瑞,李晓波,王吉,卫礼,巩薇,贺争鸣,岳秉飞. 中国比较医学杂志. 2014(12)
[8]树鼩的生物学特性研究概述[J]. 苏傲蕾,秦银鸽,郑禹,陈群,运晨霞,黄正团,冷静. 动物医学进展. 2014(10)
[9]树鼩呼肠孤病毒RT-nPCR检测方法的建立及初步应用[J]. 李晓飞,殷安国,张媛,罗军,孙晓梅,代解杰. 中国比较医学杂志. 2014(06)
[10]人腺病毒的研究进展[J]. 高文娟,金玉,段招军. 病毒学报. 2014(02)
博士论文
[1]人呼吸道腺病毒55型的基因组学与病原学特征研究[D]. 刘娟.中国人民解放军军事医学科学院 2014
[2]基于重组腺病毒载体的烈性病原体疫苗研究[D]. 吴诗坡.中国人民解放军军事医学科学院 2013
[3]儿童急性呼吸道感染病毒流行特征与基因特征研究[D]. 卢庆彬.山东大学 2013
[4]溶瘤腺病毒SG655-mGMP对肿瘤干细胞的治疗作用研究[D]. 吕赛群.第二军医大学 2013
[5]Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定和生物学特性研究及重组禽腺病毒的构建[D]. 张明明.扬州大学 2008
硕士论文
[1]禽腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用[D]. 邱丽叶.东北农业大学 2016
[2]荧光定量PCR快速检测登革1型病毒[D]. 熊建英.南方医科大学 2012
[3]靶向肿瘤细胞的腺病毒纤毛蛋白改造研究[D]. 陈亚龙.浙江理工大学 2010
本文编号：3453075
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３腺病毒复制周期简图??
中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生毕业论文??⑦将滤柱置于新的罔心管中，室温１２０００ｒｐｍ离心ｌｍｉｎ。??⑧将滤柱安置于新的１．５ｍＬ离心管中，在滤柱膜中央加入３０｜ｉＬ?ＤＥＰＣ水，??室温静置ｌｍｉｎ。室温１２０００ｒｐｍ离心ｌｍｉｎ洗脱ＤＮＡ。??纯化得到的ＤＮＡ产物由宝生物（大连）工程公司测序，测序结果于ＮＣＢ１??ＢＬＡＳＴ进行序列相似性和同源性分析，以确定ＰＣＲ检测的准确性。??２．实验结果??２．１树駒肺组织病理学病变特征观察??病毒性肺炎主要表现为肺间质的炎症。肉眼观，病变常不明显。病变区域呈??暗红色，肺体积增大（图４）。??
２．２树駒原代肾细胞ＴＫＣ和ＣＫ１８的鉴定??酶消化法所得肾细胞于１２ｈ贴壁，２４小时细胞从片断和团块周边贴壁生长，４８??小时细胞铺满瓶底，细胞呈扁平不规则多角形，鹅卵石样排列（图６）。传代后１２ｈ??细胞开始贴壁，２４小时完全贴壁。??＿??图６树駒原代肾细胞（１０〇ｘ）??Ｆｉｇ．６?Ｔｒｅｅ?ｓｈｒｅｗ?ｋｉｄｎｙ?ｃｅｌｌｓ?（１０〇ｘ）．??用优化的培养条件对分离得到的树駒原代肾细胞进行培养第４天，可在显微??２６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]树鼩腺病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 宋庆凯,李晓飞,苗雨润,张志成,王璇,袁圆,代解杰,孙晓梅. 中国比较医学杂志. 2018(03)
[2]牛病毒性腹泻病毒、牛传染性支气管炎病毒和口蹄疫病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 宋爽,赵柏林,曲萍,胡冬梅,孙雨,董浩,杨林,宋晓晖,潘树德. 中国预防兽医学报. 2017(02)
[3]山东省血清4型禽腺病毒的分离鉴定[J]. 于可响,黄兵,凌红丽,庞运倩,王友令,李峰,亓丽红,宋敏训. 中国动物传染病学报. 2016(05)
[4]Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及其致病性研究[J]. 李晓林,王相芹,罗济冠,李明义. 中国动物检疫. 2016(08)
[5]禽坦布苏病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 万春和,陈翠腾,傅秋玲,程龙飞,傅光华,陈红梅,施少华,黄瑜. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(08)
[6]腺病毒感染研究进展[J]. 谢立,杨旭辉,陈恩富. 浙江预防医学. 2015(03)
[7]树鼩腺病毒（TAV）PCR方法的建立及初步应用[J]. 王淑菁,付瑞,李晓波,王吉,卫礼,巩薇,贺争鸣,岳秉飞. 中国比较医学杂志. 2014(12)
[8]树鼩的生物学特性研究概述[J]. 苏傲蕾,秦银鸽,郑禹,陈群,运晨霞,黄正团,冷静. 动物医学进展. 2014(10)
[9]树鼩呼肠孤病毒RT-nPCR检测方法的建立及初步应用[J]. 李晓飞,殷安国,张媛,罗军,孙晓梅,代解杰. 中国比较医学杂志. 2014(06)
[10]人腺病毒的研究进展[J]. 高文娟,金玉,段招军. 病毒学报. 2014(02)
博士论文
[1]人呼吸道腺病毒55型的基因组学与病原学特征研究[D]. 刘娟.中国人民解放军军事医学科学院 2014
[2]基于重组腺病毒载体的烈性病原体疫苗研究[D]. 吴诗坡.中国人民解放军军事医学科学院 2013
[3]儿童急性呼吸道感染病毒流行特征与基因特征研究[D]. 卢庆彬.山东大学 2013
[4]溶瘤腺病毒SG655-mGMP对肿瘤干细胞的治疗作用研究[D]. 吕赛群.第二军医大学 2013
[5]Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定和生物学特性研究及重组禽腺病毒的构建[D]. 张明明.扬州大学 2008
硕士论文
[1]禽腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用[D]. 邱丽叶.东北农业大学 2016
[2]荧光定量PCR快速检测登革1型病毒[D]. 熊建英.南方医科大学 2012
[3]靶向肿瘤细胞的腺病毒纤毛蛋白改造研究[D]. 陈亚龙.浙江理工大学 2010
本文编号：3453075
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