多效生长因子单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2021-10-24 15:08

　　多效生长因子（pleiotrophin,PTN）是一种与Midkine（肝素结合细胞因子）同族的肝素结合因子。多效生长因子又名为HB-GAM、HBNF、OSF-1和NEGF1等。随着年龄的增长,PTN的表达位置也相应发生改变,从胚胎发育时期的神经及胚胎中胚层,到成年后表达局限在乳腺、心脏和睾丸等部位。国内外研究表明,PTN具有多种生物学功能,如促有丝分裂、促肿瘤生长、炎症发生、血管生成和骨发育等。尤其是在多种肿瘤疾病发生进展过程中,均检测到多效生长因子有一定程度的表达,典型的像乳腺癌、胃癌、肝癌和胰腺癌等。这表明PTN可以作为潜在的检测肿瘤进程的标志物,同时也可以作为肿瘤患者预后的标志。因此,制备多效生长因子抗体可以在实验科学及临床上得以应用,具有一定价值及意义。本论文首先构建pET-28a-his-PTN质粒,然后研究在大肠杆菌中利用IPTG诱导多效生长因子蛋白的表达条件。其中主要影响因素有诱导前生物量、氧通量、诱导温度、诱导剂浓度和诱导时间,并利用均匀设计试验成功找出其最优表达条件。镍钴亲和层析实验利用不同浓度咪唑缓冲液纯化出带有六个组氨酸（his）标签的蛋白,最终取得大量多效生长... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

pET-28a质粒图谱

图 3.1 pET-28a 质粒图 PTN 用 BamHⅠ和 NdeⅠ连接产物在 Rosetta DE3隆，并提取质粒。BamH粒鉴定结果如图 3.2 所示

白诱导条件研究结果499-2 菌生长曲线的绘制 499-2 号菌液活化后，次日取 100μl 菌液于 10mlLB 中。37℃、转速培养，于 0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h；以 lg10×OD60间为横坐标绘制菌生长曲线。

【参考文献】：
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本文编号：3455496