应用表达人CD19分子和luciferase的EG7细胞构建小鼠淋巴瘤模型的实验研究

发布时间：2021-11-03 12:06

　　研究背景:近年来,嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor T-cell Immunotherapy,CAR-T）免疫疗法在恶性血液肿瘤生物治疗领域取得了前所未有的成功。CAR-T免疫疗法的原理在于CAR修饰的T细胞可以特异性地识别血液肿瘤相关抗原,CAR-T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性均高于常规应用的免疫细胞。然而,CAR-T细胞免疫疗法对于实体肿瘤作用不佳,其主要原因包括:（1）CAR-T细胞进入实体肿瘤能力有限;（2）一旦进入也常由于肿瘤组织内免疫抑制微环境而不能有效发挥功能;（3）进入肿瘤中的CAR-T细胞会发生“耗竭”等T细胞固有的负性调节现象。因此,我们需要寻找新的效应细胞,能够更容易进入肿瘤组织局部,并且能够通过直接杀伤肿瘤细胞或者协同T细胞等多种方式发挥抗肿瘤作用。我们课题组的前期工作构建了表达抗人CD19-CAR的新型效应细胞,在由白血病患者肿瘤细胞构建的小鼠异种白血病模型中回输后,小鼠外周血中肿瘤细胞负荷显著降低、小鼠生存时间延长、生存率提高。但由于在小鼠异种白血病模型中,为保证人肿瘤细胞的生存及成瘤,应用的是T细胞、B细胞及NK细胞... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

流式检测慢病毒转染后获得的稳定转染细胞表面人CD19分子的表

物活体成像仪及酶标仪能够检测到稳定转染细胞表达的 的发光信号素底物作用后，用小动物活体成像仪检测可见转染细胞有9和luciferase的EG7细胞其信号强度虽然较表达GC261，但是仍可见明显发光信号。而加入 PBS 溶液的对照组M 培养基组均未见发光信号（图 3.2）。酶标仪检测可见GC261 和 luciferase 的 B4 细胞和表达人 CD19 和 lucifera信号。在加入底物 13min 后，表达 GC261 和 luciferase 的最大，随着时间的推移，发光强度显著下降。表达人 CD19在与底物作用13min后发光强度达到最高，与表达GC261同，在随后观察的 15min 里，发光强度稳定形成平台期-WT 与 DMEM 培养基组均未检测到发光信号（图 3.3）。

图 3.3 酶标仪检测转染细胞表达的 luciferase 与底物作用后的发光情况ure.3.3 Detection of the luminescence of transfected EG7 cell by microplate 不同数量的稳定表达人 CD19 分子以及 luciferase 的 EG7 下接种给 C57BL/6 小鼠后肿瘤形成情况.1 不同数量稳定转染细胞皮下接种后小鼠的成瘤率将不同数量的表达人 CD19 分子和 luciferase 的 EG7 细胞皮下接7BL/6 小鼠构建淋巴瘤模型实验中，接种后第 5 天 1×106组有 2 只小鼠可股沟皮下触及硬性结节，拨开腹部毛发肉眼见细小突起；而 1×105组 25×105组5只小鼠在接种后第7天于接种部位触摸到肿瘤结节存在（图3

【参考文献】：
期刊论文
[1]淋巴瘤诊断与治疗的十年回顾[J]. 韩颖,石远凯.  实用肿瘤杂志. 2017(06)
[2]淋巴瘤实验动物模型构建的研究与应用[J]. 熊豫麟,张远旭,黄云超,杨世华.  广东医学. 2014(09)



本文编号：3473653