TLR4对RSV感染中枢神经元诱导的NLRP3炎性小体与细胞自噬的影响及褪黑素的作用
发布时间：2021-11-04 19:51
目的以RSV感染人神经元细胞为基础,通过TLR4-siRNA手段沉默人神经元SY5Y细胞中的TLR4受体,并给予适量褪黑素作用于RSV感染的SY5Y细胞,探究TLR4受体的激活和给予外源性褪黑素对RSV感染神经元诱导NLRP3炎性小体的产生与促进细胞自噬发生的调节作用以及褪黑素可能的保护机制,为临床预防和治疗RSV感染中枢神经系统提供新的思路。方法首先以RSV体外感染SY5Y细胞,分别于感染后4、12、24和48h收集细胞和培养上清液,并设立不同的组别,以未感染的细胞作为对照组,判断RSV感染对人神经元细胞的NLRP3和自噬影响;再以不同TLR4-siRNA序列干扰SY5Y细胞TLR4受体,选择最合适的沉默序列,设立TLR4-siRNA实验组;最后用不同浓度梯度的褪黑素作用SY5Y细胞后,CCK8检测神经元活性情况,选取适宜浓度褪黑素设立为MT实验组。（1）TCLD50检测病毒滴度;（2）酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组培养上清液中IL-1β、IL-18和TNF-α炎症因子的表达;（3）免疫印迹法（Western-blot）检测各组不同时间点TLR4、NLRP...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
WesternBlot检测si-R1和si-R2两条序列的转染效果
我们用 siRNA 沉默 TLR4 受体表达，用荧光显微镜检测了不同时间点的。结果显示，转染 SY5Y 细胞后 4h、12h、24h 和 48h 可见荧光标记的绿并且该荧光随沉默时间呈一定规律，有时间依赖性，24h 的转染效率最tern Blot 的检测结果一样，见图 2。同时我们提取 siRNA 沉默 TLR4 后和蛋白，使用 Western Blot 的方法检测不同转染时间的 TLR4 蛋白的表达情与荧光显微镜观察到的结果一样。见下图 3。
结果显示，转染 SY5Y 细胞后 4h、12h、24h 和 48h 可见荧光标记的绿色。并且该荧光随沉默时间呈一定规律，有时间依赖性，24h 的转染效率最高estern Blot 的检测结果一样，见图 2。同时我们提取 siRNA 沉默 TLR4 后和时的蛋白，使用 Western Blot 的方法检测不同转染时间的 TLR4 蛋白的表达情况果与荧光显微镜观察到的结果一样。见下图 3。图 2 转染 SY5Y 细胞后 4h、12h、24h 和 48h 可见荧光标记的绿色荧光Fig2: Fluorescently labeled green fluorescence was observed at 4h, 12h, 24h and 48h aftertransfection of SY5Y cells.
【参考文献】：
期刊论文
[1]褪黑素对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 张冰缘,朱琳,刘再英,武艳. 世界最新医学信息文摘. 2018(24)
[2]褪黑素通过沉默信息调节因子1减轻线粒体氧化应激对脑缺血-再灌注小鼠的作用[J]. 刘阳阳,梁国标,甄恩迪,毛崇丹,高旭,郝广志,董玉书. 中国脑血管病杂志. 2017(10)
[3]自噬、自噬性细胞死亡与肿瘤的研究进展[J]. 伍思霖,黄玉莹,丁海林,顾晔,张晓彪. 生命科学. 2017(08)
[4]褪黑素对大鼠急性脊髓损伤后自噬的影响[J]. 徐玉生,汪鑫,理阳,朱海洋,钟斌,李鹏辉,苏一帆. 医药论坛杂志. 2017(05)
[5]Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展[J]. 王雪,张评浒. 中国药科大学学报. 2017(01)
[6]Autophagic activity in neuronal cell death[J]. Robert W.Button,Shouqing Luo,David C.Rubinsztein. Neuroscience Bulletin. 2015(04)
[7]有偿献血人群血浆IL-18水平与HCV感染及其基因型的相关性研究[J]. 薛兴欣,蔡立,王佳佳,唐筛娣,喻荣彬,苏静,路滟,王洁,张云. 中华疾病控制杂志. 2014(07)
[8]Neuropeptide Y protects cerebral cortical neurons by regulating microglial immune function[J]. Qijun Li,Changzheng Dong,Wenling Li,Wei Bu,Jiang Wu,Wenqing Zhao. Neural Regeneration Research. 2014(09)
[9]手足口病68例临床分析[J]. 吴晓波. 中国小儿急救医学. 2006(06)
[10]手足口病200例临床分析[J]. 王新强,李静,曲梅. 中国煤炭工业医学杂志. 2001(03)
博士论文
[1]SIRT1通过线粒体自噬阻断NLRP3炎症小体活化和足细胞损伤[D]. 白咪.南京医科大学 2016
[2]RSV诱导Hep2细胞自噬在病毒复制中的作用及其机制研究[D]. 李苗.河北医科大学 2016
本文编号：3476340
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
WesternBlot检测si-R1和si-R2两条序列的转染效果
我们用 siRNA 沉默 TLR4 受体表达，用荧光显微镜检测了不同时间点的。结果显示，转染 SY5Y 细胞后 4h、12h、24h 和 48h 可见荧光标记的绿并且该荧光随沉默时间呈一定规律，有时间依赖性，24h 的转染效率最tern Blot 的检测结果一样，见图 2。同时我们提取 siRNA 沉默 TLR4 后和蛋白，使用 Western Blot 的方法检测不同转染时间的 TLR4 蛋白的表达情与荧光显微镜观察到的结果一样。见下图 3。
结果显示，转染 SY5Y 细胞后 4h、12h、24h 和 48h 可见荧光标记的绿色。并且该荧光随沉默时间呈一定规律，有时间依赖性，24h 的转染效率最高estern Blot 的检测结果一样，见图 2。同时我们提取 siRNA 沉默 TLR4 后和时的蛋白，使用 Western Blot 的方法检测不同转染时间的 TLR4 蛋白的表达情况果与荧光显微镜观察到的结果一样。见下图 3。图 2 转染 SY5Y 细胞后 4h、12h、24h 和 48h 可见荧光标记的绿色荧光Fig2: Fluorescently labeled green fluorescence was observed at 4h, 12h, 24h and 48h aftertransfection of SY5Y cells.
【参考文献】：
期刊论文
[1]褪黑素对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用[J]. 张冰缘,朱琳,刘再英,武艳. 世界最新医学信息文摘. 2018(24)
[2]褪黑素通过沉默信息调节因子1减轻线粒体氧化应激对脑缺血-再灌注小鼠的作用[J]. 刘阳阳,梁国标,甄恩迪,毛崇丹,高旭,郝广志,董玉书. 中国脑血管病杂志. 2017(10)
[3]自噬、自噬性细胞死亡与肿瘤的研究进展[J]. 伍思霖,黄玉莹,丁海林,顾晔,张晓彪. 生命科学. 2017(08)
[4]褪黑素对大鼠急性脊髓损伤后自噬的影响[J]. 徐玉生,汪鑫,理阳,朱海洋,钟斌,李鹏辉,苏一帆. 医药论坛杂志. 2017(05)
[5]Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展[J]. 王雪,张评浒. 中国药科大学学报. 2017(01)
[6]Autophagic activity in neuronal cell death[J]. Robert W.Button,Shouqing Luo,David C.Rubinsztein. Neuroscience Bulletin. 2015(04)
[7]有偿献血人群血浆IL-18水平与HCV感染及其基因型的相关性研究[J]. 薛兴欣,蔡立,王佳佳,唐筛娣,喻荣彬,苏静,路滟,王洁,张云. 中华疾病控制杂志. 2014(07)
[8]Neuropeptide Y protects cerebral cortical neurons by regulating microglial immune function[J]. Qijun Li,Changzheng Dong,Wenling Li,Wei Bu,Jiang Wu,Wenqing Zhao. Neural Regeneration Research. 2014(09)
[9]手足口病68例临床分析[J]. 吴晓波. 中国小儿急救医学. 2006(06)
[10]手足口病200例临床分析[J]. 王新强,李静,曲梅. 中国煤炭工业医学杂志. 2001(03)
博士论文
[1]SIRT1通过线粒体自噬阻断NLRP3炎症小体活化和足细胞损伤[D]. 白咪.南京医科大学 2016
[2]RSV诱导Hep2细胞自噬在病毒复制中的作用及其机制研究[D]. 李苗.河北医科大学 2016
本文编号：3476340
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