圆柱瘤蛋白相互作用蛋白SPATA2调控TNFR介导的炎症应答和细胞死亡

发布时间：2021-11-08 06:08

　　去泛素化酶（deubiquitinase, DUB）圆柱瘤蛋白（cylindromatosis,CYLD）是肿瘤坏死因子受体（tumor necrosis factor receptor,TNFR）介导的炎症反应和细胞死亡的重要调节因子,然而CYLD特异性识别底物的机制尚不清楚。本研究通过生物识别（BioID）筛选得到CYLD的相互作用蛋白——精子发生相关蛋白2（spermatogenesis associated 2,SPATA2）,并利用免疫沉淀法（immunoprecipitation, IP）和双分子荧光互补技术（bimolecular fluorescence complementation,BiFC）证实了CYLD与SPATA2的相互作用。SPATA2敲降或敲除抑制了TNF-α诱导的细胞凋亡和程序性死亡,增强了炎症相关基因的表达。机制研究发现,响应TNF-α刺激,SPATA2促进CYLD向肿瘤坏死因子受体信号复合物（tumor necrosis factor receptor signaling complex,TNFRSC）招募和催化受体相互作用蛋白1（receptor-... 

【文章来源】：现代免疫学. 2019,39(06)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

SPATA2-CYLD相互作用的鉴定与验证

CYLD的一个重要功能是在TNFR介导的信号通路中去泛素化RIP1,进而抑制NF-κB激活,促进细胞死亡。为了阐明SPATA2是否在这一过程中发挥作用,本研究分析了SPATA2敲降对TNF-α诱导的细胞凋亡的影响。用TNF-α和蛋白合成抑制剂CHX处理对照组和SPATA2敲降组的HeLa细胞,诱导细胞凋亡,然后用Annexin V和PI染色,用FCM分析细胞凋亡情况。结果显示,TNF-α和CHX联合处理导致明显的细胞凋亡;与对照组细胞相比,SPATA2敲降组细胞凋亡显著减少,说明SPATA2有促进细胞凋亡的作用。(图2)2.3 SPATA2促进TNF-α诱导的细胞坏死

以上研究结果显示,SPATA2在调控TNF通路介导的炎症反应和细胞死亡方面具有与CYLD相一致的功能,推测SPATA2作为CYLD的相互作用蛋白可能在这个过程中发挥调控CYLD的作用。为了验证这一推测,采用IP检测了TNF下游信号复合物TNFRSC的聚集和RIP1泛素化修饰。结果显示,在对照组细胞中TNF-α诱导CYLD 向TNFRSC的招募,而在SPATA2敲降组细胞中, CYLD的招募大幅减少(图5A),说明SPATA2促进CYLD的招募。与CYLD招募水平相一致,SPATA2敲降明显增加了RIP1的泛素化水平,达到了与CYLD敲降类似的效果(图5B)。这些结果表明,SPATA2促进CYLD招募到TNFRSC进行RIP1的泛素化,同时很好地解释了SPATA2如何响应TNF-α刺激促进细胞死亡、抑制炎症反应。图4 野生型和SPATA2敲除的BMDM诱导的细胞因子表达变化情况

【参考文献】：
期刊论文
[1]溃疡性结肠炎发病机制研究进展[J]. 崔畅婉,孙峥嵘.  现代免疫学. 2019(01)



本文编号：3483159