MAPK信号通路在低剪切力诱导内皮细胞Fractalkine表达中的作用

发布时间：2017-05-10 09:12

  本文关键词：MAPK信号通路在低剪切力诱导内皮细胞Fractalkine表达中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:血流剪切应力与血管内皮之间的相互作用是决定心血管功能的一个重要指标,本研究意在探讨p38、JNK细胞内丝裂原活化蛋白激酶〔mitogen-activated protein kinaes,MAPK)家族亚类信号转导通路在低剪切力诱导的内皮细胞FKN基因表达中的调控作用。方法:1)用M199生长液(含1%青链霉素合剂和10%的胎牛血清的M199培养基)培养EA.HY926细胞株。在光学显微镜和电子显微镜下观察细胞形态,通过Ⅷ因子相关抗原免疫组化及细胞的增长曲线鉴定EA.HY926细胞株。2)用光学显微镜观察低剪切力(4.58dyne/cm2)处理60min后,EA.HY926细胞株的形态学变化。3)用Western blot免疫印迹方法分析低剪切力(4.58dyne/cm2)处理不同时间对EA.HY926细胞株p38MAPK和JNK信号分子磷酸化水平的影响,并分析相应的阻断剂对p38和JNK磷酸化水平的抑制程度;观察p38、JNK通路阻断剂对低剪切应力诱导的EA.HY926人脐静脉内皮细胞株FKN蛋白表达的影响。4)采用荧光定量RT-PCR方法检测细胞中FKN mRNA的表达,研究p38MAPK和JNK信号通路阻断剂对低剪切应力诱导的EA.HY926人脐静脉内皮细胞株FKN m RNA表达的影响。结果:1)EA.HY926细胞株形态学观察发现细胞在生长2~3d后即可铺满单层,呈梭形、漩涡状排列,传代后可见管腔样结构,细胞可长成复层;透射电子显微镜下可发现血管内皮细胞特有的杆状细胞器,即Webel-Palade小体;免疫组化结果显示,细胞质表现为棕黄色颗粒;EA.HY926细胞株生长曲线稳定,适用于细胞实验。2)低剪切力(4.58dyne/cm2)处理60min后细胞形态变化不规则,局部区域可见细胞间隙增大、细胞皱缩,少量细胞有脱落现象。3)低剪切力处理可引起EA.HY926细胞株p38蛋白磷酸化水平的上调,其表达与剪切力作用时间有关,低剪切力作用5min后其表达量开始增加,30min时表达量最高,之后表达量降低。磷酸化的p38可进入细胞核,通过相应的信号转导通路调控基因表达。用SB203580阻断p38信号通路可显著抑制低剪切力所致EA.HY926细胞株FKN基因的上调。4)低剪切力处理可引起EA.HY926细胞株JNK蛋白磷酸化水平的上调,其表达与剪切力作用时间有关,随剪切应力作用时间的延长磷酸化JNK表达量也增加,60min时JNK磷酸化程度最高,呈时间依赖性。磷酸化的JNK移位入核,通过相应的信号转导通路调控有关基因表达。用SP600125阻断JNK信号通路可显著抑制低剪切力所致EA.HY926细胞株FKN基因的上调。5)p38和JNK信号通路阻断剂抑制低剪切力所致EA.HY926细胞株FKN蛋白上调表达。结论:剪切力可激活p38和JNK MAPK信号转导途径,激活的p38和JNK信号分子参与调节低剪切力诱导的内皮细胞Fractalkine的表达上调过程。p38 MAPK和JNK信号通路抑制剂能够下调低剪切力诱导Fractalkine的表达。
【关键词】：丝裂原活化蛋白激酶 低剪切应力 FKN EA.HY926细胞株
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R331

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本文编号：354407