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PPE68/Ipr1基因的表达、鉴定及初步应用

发布时间:2021-12-30 13:55
  本课题将Ipr1 (Intracellular pathogen resistance 1,细胞内病原体抗性基因1)克隆入原核表达质粒pET32a(+),构建了原核基因表达质粒pET32a(+)-Ipr1,并成功获得Ipr1重组蛋白;将Ipr1基因与结核分枝杆菌PPE68基因分别克隆入真核表达载体pBudCE4.1中,构建真核共表达质粒(pbudce4.1/ Ipr1/PPE68),体外转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,并在转录水平及翻译水平鉴定了Ipr1基因和PPE68基因的表达;同时构建了Ipr1基因和PPE68基因共表达穿梭质粒(pbudce4.1-Ipr1-PPE68-OriM),并将该质粒电转到BCG中,构建Ipr1/ PPE68重组BCG,为进一步研究Ipr1/PPE68重组BCG对结核分枝杆菌感染的免疫保护作用打下基础。第一部分Ipr1基因原核表达质粒的构建及鉴定目的:构建Ipr1基因原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达和鉴定。方法: PCR扩增质粒PMD19-T simple-Ipr1中的目的基因Ipr1,将目的基因Ipr1克隆入原核质粒pET32a(+),构建原... 

【文章来源】:重庆医科大学重庆市

【文章页数】:56 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

PPE68/Ipr1基因的表达、鉴定及初步应用


Ipr1基因PCR扩增产物Fig1.PCRproductofIpr1geneM:DNAMarkerDL2000

PPE68/Ipr1基因的表达、鉴定及初步应用


重组质粒pET32a(+)-Ipr1双酶切的鉴定Fig2restrictionmapofrecombinantplasmidpET32a(+)-Ipr1byBamHⅠ/KpnⅠM:DNAMarkerDL2000

重组子,鉴定组,免疫印迹,大肠杆菌


图 3 重组子在大肠杆菌 BL21 中的表达的 SDS-PAGE 分析Fig. 3 SDS-PAGE of Ipr1expression products in E. coli BL 2 1M. protein marker1-2. BL21 with pET32a(+) uninduced by IPTG3. BL21 uninduced by IPTG4. BL21 with pET32a(+)-Ipr1 uninduced by IPTG蛋白的 Western blot 鉴定组蛋白与 V5 抗体做免疫印迹,可见 70kDa 处有一条明显条带(图

【参考文献】:
期刊论文
[1]分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70的构建及鉴定[J]. 吕琳,曹红丹,王丕龙,刘少宁,王丽娟,向廷秀.  第三军医大学学报. 2008(10)
[2]GLS/IL-12重组耻垢分枝杆菌的构建及其在小鼠体内的表达[J]. 杨春,何永林,伊正君,李俊明,李娜,朱道银.  免疫学杂志. 2007(01)
[3]多基因共表达载体的构建策略[J]. 曹慧青.  国外医学(分子生物学分册). 2002(01)



本文编号:3558332

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