CTGF基因的克

发布时间：2022-01-02 04:13

　　背景许多促血管生成因子、血管生成因子和抗血管生成因子参与了糖尿病视网膜病变（Diabetic retinopathy,DR）的发病和进展。结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）作为一种细胞基质调节因子,在细胞的增殖、黏附、迁移以及血管生成、炎症反应和组织重构等生理、病理过程中发挥重要的调节作用。近年来,CTGF与糖尿病及其并发症的关系逐渐受到重视,但CTGF在DR中的作用和机制尚未完全阐明。目的克隆人CTGF基因cDNA,构建重组表达载体pCTGF并转染人胚肾293（HEK293）细胞,检测转染细胞中重组CTGF基因和蛋白的表达及对细胞增殖的影响,为制备CTGF抗体、进行CTGF表达调控和功能研究奠定实验基础。方法根据GenBank数据库中人CTGF的基因序列,设计特异性引物,以人胚肺成纤维HFL-I细胞cDNA为模板,通过PCR反应扩增CTGF基因并进行测序验证;将序列验证正确的CTGF cDNA基因克隆到真核表达载体pEGFP,将通过双酶切鉴定正确的表达载体命名为p-CTGF并转染HEK293细胞,MTT法检测表达载体对HEK2... 

【文章来源】：新乡医学院河南省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

真核表达载体pEGFP的质粒图谱示意图

图 2 真核表达载体 pCTGF 的质粒构建过程养及转染复苏线灭菌超净工作台及细胞间 30 min，并将完全培养基 DMEM期冻存细胞投入 370C 水浴锅中，不断晃动，使之快速融粒时，酒精消毒后转入超净工作台中；胞悬液转移至 10 mL 的离心管中，加入 3 倍体积的完全 DM平离心 5 min；离心一次，调整合适细胞密度，放入细胞培养箱内，370C、5取细胞前，做好防护措施以防液氮溅落冻伤；快，取完细胞及时盖好液氮罐，防止液氮过多挥发；

提取的细胞总RNA电泳图

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3563450