PCF经ROS/UCP2/cytoC信号通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的调控
发布时间：2022-01-02 04:19
目的复制8J·cm-2UVA辐射损伤HaCaT角质形成细胞的凋亡模型,探究线粒体解偶联蛋白2（uncoupling protein 2,UCP2）在UVA诱导的HaCaT细胞凋亡中的调控作用,确定线粒体解偶联蛋白2对活性氧的调控,从线粒体呼吸链复合酶、活性氧（ROS）、线粒体解偶联蛋白2（UCP2）、细胞色素C（cytoC）、凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)的角度,研究扇贝多肽（polypeptide from Chlamys farreri, PCF）保护UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法复制8J·cm-2 UVA照射HaCaT细胞后18h的最佳凋亡模型,实验设计分为:对照组、UVA模型组、PCF组(5.69, 2.84, 1.42 mmol·L-1PCF)、抑制剂组(5mmol·L-1 NAC)。采用琼脂糖凝胶电泳法和Hochest 33258荧光染色观察UVA引起的细胞凋亡形态学变化及细胞凋亡率;2,7-二氯氢化荧光素二酯荧光探针,检测PCF对UVA损伤细胞后ROS生成量的影响; RT-PCR检测胞浆...
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCF和抑制剂对UVA诱导的HaCaT细胞DNA片段形成的影响
图2.2 PCF对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡形态学变化的影响（x ±s, n=3）A:正常细胞对照组；B:模型组；C:1.42 mmol/L PCF 组；D:2.84 mmol/L PCF 组；E: 5.69 mmol/LPCF 组；F: NAC 组2.3.2 PCF 对 UVA 诱导的 HaCaT 细胞凋亡的影响2.3.2.1 western blot 检测 PCF 上调 Cu-Zn-SOD 蛋白表达抑制 HaCaT 细胞凋亡Western blot 检测 UVA 照射后 HaCaT 细胞胞浆中 Cu-ZnSOD 蛋白表达水平高低，用 Cu-ZnSOD 与 β-actin 光密度比值表示其表达水平的高低，所得结果如图 2.3UVA 照射后继续培养 18h，提取总蛋白进行实验，结果表明：UVA 模型组 Cu-ZnSOD的表达水平有显著地下降，与正常对照组细胞的表达量相比差异有显著统计学意义
.3 PCF 对 UVA 辐射的 HaCaT 细胞内 Cu,Zn-SOD 蛋白表达的影响( x ± s，对照组；2—UVA辐射模型组；3—5.69 mmol/LPCF组；4—2.84 mmol/LPCF组mmol/LPCF组；0.01 与对照组比较；bP<0.01 与 UVA 模型组比较；cP<0.05 与 UVA+5.68 mm组比较；dP<0.05 与 UVA+2.84 mmol·L-1PCF 组比较2 RT-PCR 检测 PCF 对 CAT 的调控A 辐射损伤后继续培养 18h 然后收集细胞，提取 RNA，反转录成 cCR 扩增反应，扩增结果良好，没有非特异性扩增产以及和引物二聚见图2.4，CAT基因浓度/内参GAPDH基因浓度比值表示CAT的基因可以看出：UVA 辐射模型组中的 CAT 基因表达量明显降低，与对照著的统计学差异 (P<0.01)；各剂量 PCF 组 CAT mRNA 的表达量均有
【参考文献】：
期刊论文
[1]紫外线对表皮细胞氧化损伤的实验研究[J]. 徐自祥. 昆明医学院学报. 2010(04)
[2]解偶联蛋白2与衰老[J]. 胡祥上,邹原. 现代生物医学进展. 2009(02)
[3]线粒体呼吸链与活性氧[J]. 刘树森. 生命科学. 2008(04)
[4]紫外线辐射对人类皮肤健康的影响[J]. 李立,白雪涛. 国外医学(卫生学分册). 2008(04)
[5]扇贝多肽经由aSMase-JNK通路抑制UVA诱导HaCaT细胞凋亡[J]. 邢雁霞,苏爱,杜卫,王春波. 高等学校化学学报. 2008(04)
[6]扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3[J]. 李金莲,严州萍,陈雪红,王跃军,孙谧,石宇玺,王春波. 中国药学杂志. 2007(02)
[7]解耦联蛋白2的研究进展[J]. 张春妮,刘畅,汪俊军. 医学研究生学报. 2004(09)
硕士论文
[1]老年大鼠肝脏解偶联蛋白2表达与衰老关系的研究[D]. 胡祥上.大连医科大学 2008
本文编号：3563460
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCF和抑制剂对UVA诱导的HaCaT细胞DNA片段形成的影响
图2.2 PCF对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡形态学变化的影响（x ±s, n=3）A:正常细胞对照组；B:模型组；C:1.42 mmol/L PCF 组；D:2.84 mmol/L PCF 组；E: 5.69 mmol/LPCF 组；F: NAC 组2.3.2 PCF 对 UVA 诱导的 HaCaT 细胞凋亡的影响2.3.2.1 western blot 检测 PCF 上调 Cu-Zn-SOD 蛋白表达抑制 HaCaT 细胞凋亡Western blot 检测 UVA 照射后 HaCaT 细胞胞浆中 Cu-ZnSOD 蛋白表达水平高低，用 Cu-ZnSOD 与 β-actin 光密度比值表示其表达水平的高低，所得结果如图 2.3UVA 照射后继续培养 18h，提取总蛋白进行实验，结果表明：UVA 模型组 Cu-ZnSOD的表达水平有显著地下降，与正常对照组细胞的表达量相比差异有显著统计学意义
.3 PCF 对 UVA 辐射的 HaCaT 细胞内 Cu,Zn-SOD 蛋白表达的影响( x ± s，对照组；2—UVA辐射模型组；3—5.69 mmol/LPCF组；4—2.84 mmol/LPCF组mmol/LPCF组；0.01 与对照组比较；bP<0.01 与 UVA 模型组比较；cP<0.05 与 UVA+5.68 mm组比较；dP<0.05 与 UVA+2.84 mmol·L-1PCF 组比较2 RT-PCR 检测 PCF 对 CAT 的调控A 辐射损伤后继续培养 18h 然后收集细胞，提取 RNA，反转录成 cCR 扩增反应，扩增结果良好，没有非特异性扩增产以及和引物二聚见图2.4，CAT基因浓度/内参GAPDH基因浓度比值表示CAT的基因可以看出：UVA 辐射模型组中的 CAT 基因表达量明显降低，与对照著的统计学差异 (P<0.01)；各剂量 PCF 组 CAT mRNA 的表达量均有
【参考文献】：
期刊论文
[1]紫外线对表皮细胞氧化损伤的实验研究[J]. 徐自祥. 昆明医学院学报. 2010(04)
[2]解偶联蛋白2与衰老[J]. 胡祥上,邹原. 现代生物医学进展. 2009(02)
[3]线粒体呼吸链与活性氧[J]. 刘树森. 生命科学. 2008(04)
[4]紫外线辐射对人类皮肤健康的影响[J]. 李立,白雪涛. 国外医学(卫生学分册). 2008(04)
[5]扇贝多肽经由aSMase-JNK通路抑制UVA诱导HaCaT细胞凋亡[J]. 邢雁霞,苏爱,杜卫,王春波. 高等学校化学学报. 2008(04)
[6]扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3[J]. 李金莲,严州萍,陈雪红,王跃军,孙谧,石宇玺,王春波. 中国药学杂志. 2007(02)
[7]解耦联蛋白2的研究进展[J]. 张春妮,刘畅,汪俊军. 医学研究生学报. 2004(09)
硕士论文
[1]老年大鼠肝脏解偶联蛋白2表达与衰老关系的研究[D]. 胡祥上.大连医科大学 2008
本文编号：3563460
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/3563460.html
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