广州管圆线虫功能化纳米金棒抗原筛选及血清学诊断的基础研究
发布时间：2022-01-06 01:14
目的制备广州管圆线虫幼虫粗抗原、排泄分泌粗抗原、成虫粗抗原、幼虫纯化抗原和成虫纯化抗原功能化纳米金棒,筛选广州管圆线虫功能化纳米金棒诊断抗原及最适宜浓度,证实功能化纳米金棒能够检测早期或低度感染的广州管圆线虫血清抗体。方法1.金晶种子生长法聚合径长比可控的纳米金棒。2.液氮研磨法制备广州管圆线虫幼虫粗抗原和成虫粗抗原、RPMI-1640培养法制备排泄分泌粗抗原、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）制备幼虫纯化抗原和成虫纯化抗原。巯基化粗抗原、纯化抗原与纳米金棒结合,制备功能化纳米金棒。采用紫外分光光度计扫描,通过比较表面等离子共振吸收峰的红峰移位大小,优选出功能化纳米金棒最适包被浓度。3.广州管圆线虫功能化纳米金棒检测不同感染时间、不同感染度及不同稀释度的大鼠血清抗体,根据表面等离子共振吸收峰红峰移位的变化筛选出广州管圆线虫的优势诊断抗原。4.广州管圆线虫功能化纳米金棒检测不同感染时间、不同感染度、不同稀释度血清抗体与ELISA检测的结果进行比较,探索功能化纳米金棒检测的敏感性和灵敏度。结果1.成功制备广州管圆线虫幼虫粗抗原、成虫粗抗原、排泄分泌粗抗原、幼虫纯化抗原和成虫纯化抗原功能...
【文章来源】：大理大学云南省
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－６排泄分泌粗抗原制备??
广州管圆线虫功能化纳米金棒抗原筛选及血清学诊断的基础研％??ＰＥＧ－６０００浓缩，收集排泄分泌粗抗原于冷冻干燥机内高度浓缩成排泄分泌粗抗??原冻干粉。（图１－６）??１．２．５成虫粗抗原制备［２７］将－２ＣＴＣ冻存的成虫加少许的液氮研磨粉末，丙酮脱月旨３??次，每次?５－１０ｍｉｎ，滴加?ＰＢＳ?液，反复研磨?１５－３０ｍｉｎ，４°Ｃ放置?３ｄ，?１２０００ｒ／ｍｉｎ?４°Ｃ??离心３０ｍｉｎ，上清液即为成虫粗抗原。??图１－１粪便分离Ｉ期幼虫?图１－２中间宿主?图１－３?ＩＩＩ期幼虫??ｉＭｍ??图１－４幼虫?图１－５?（ａ）肺动脉血管分离成虫?（ｂ）成虫??議??图１－６排泄分泌粗抗原制备??１．２．６纯化抗原制备采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）纯化抗原??１．２．６．１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶的制备按照目的蛋白分子量配制１０％分离胶和５％浓缩??胶，分离胶一般灌注量为４．５ｍＬ，然后用２０〇ｎＬ移液枪快速用纯水压平胶面，室??１３??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]2010～2016年大理地区广州管圆线虫病监测病例分析[J]. 李天美,陈凤,方文,陈绍荣,李婷,李科荣,刘榆华,罗家军. 热带病与寄生虫学. 2017(03)
[2]纳米金标记技术应用于病原生物检测的研究[J]. 曹颖,李家萌,赵媛,杨毅梅. 中国病原生物学杂志. 2016(03)
[3]固相金纳米棒光学免疫传感器对血吸虫病早期诊断价值的研究[J]. 何鑫,汪世平,周云飞,黄成铭,吴朝阳,沈国励. 中国病原生物学杂志. 2015(10)
[4]胶体金制备技术的改进与优化[J]. 刘颖沙,李建科,张琳,刘美慧. 食品与发酵工业. 2015(11)
[5]环卵沉淀试验在广州管圆线虫病诊断中的应用[J]. 薛士鹏. 中国热带医学. 2014(11)
[6]胶体金免疫层析法检测广州管圆线虫感染小鼠血清特异性抗体的研究[J]. 郝振华,黄慧聪,谭峰,梁韶晖. 中国病原生物学杂志. 2013(11)
[7]广州管圆线虫V期幼虫cDNA表达文库中优势诊断抗原的筛选、鉴定和克隆[J]. 陈婧,杨潇,刘茜,詹希美,何蔼. 热带医学杂志. 2013(01)
[8]免疫标记技术在广州管圆线虫病诊断中的应用进展[J]. 杨毅梅,张霄霄,崔立云,王菲,曹淑祯. 大理学院学报. 2012(09)
[9]PCR及其衍生技术在广州管圆线虫检测中的应用[J]. 崔立云,张霄霄,李锟华,杨毅梅. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(04)
[10]纳米金粒子的理化性质、制备及修饰技术和应用研究现状及进展[J]. 袁帅,刘峥,马肃. 材料导报. 2012(09)
博士论文
[1]基于金纳米颗粒标记的ICP-MS病原细菌检测方法及应用研究[D]. 王秀季.中国地质大学 2017
硕士论文
[1]纳米金棒的优化聚合及应用于血吸虫病检测的基础研究[D]. 李家萌.大理大学 2017
[2]纳米金棒标记旋毛虫诊断抗原的筛选及应用于血清学诊断的研究[D]. 曹颖.大理大学 2017
本文编号：3571419
【文章来源】：大理大学云南省
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－６排泄分泌粗抗原制备??
广州管圆线虫功能化纳米金棒抗原筛选及血清学诊断的基础研％??ＰＥＧ－６０００浓缩，收集排泄分泌粗抗原于冷冻干燥机内高度浓缩成排泄分泌粗抗??原冻干粉。（图１－６）??１．２．５成虫粗抗原制备［２７］将－２ＣＴＣ冻存的成虫加少许的液氮研磨粉末，丙酮脱月旨３??次，每次?５－１０ｍｉｎ，滴加?ＰＢＳ?液，反复研磨?１５－３０ｍｉｎ，４°Ｃ放置?３ｄ，?１２０００ｒ／ｍｉｎ?４°Ｃ??离心３０ｍｉｎ，上清液即为成虫粗抗原。??图１－１粪便分离Ｉ期幼虫?图１－２中间宿主?图１－３?ＩＩＩ期幼虫??ｉＭｍ??图１－４幼虫?图１－５?（ａ）肺动脉血管分离成虫?（ｂ）成虫??議??图１－６排泄分泌粗抗原制备??１．２．６纯化抗原制备采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）纯化抗原??１．２．６．１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶的制备按照目的蛋白分子量配制１０％分离胶和５％浓缩??胶，分离胶一般灌注量为４．５ｍＬ，然后用２０〇ｎＬ移液枪快速用纯水压平胶面，室??１３??
广州管圆线虫功能化纳米金棒抗原筛选及血清学诊断的基础研％??ＰＥＧ－６０００浓缩，收集排泄分泌粗抗原于冷冻干燥机内高度浓缩成排泄分泌粗抗??原冻干粉。（图１－６）??１．２．５成虫粗抗原制备［２７］将－２ＣＴＣ冻存的成虫加少许的液氮研磨粉末，丙酮脱月旨３??次，每次?５－１０ｍｉｎ，滴加?ＰＢＳ?液，反复研磨?１５－３０ｍｉｎ，４°Ｃ放置?３ｄ，?１２０００ｒ／ｍｉｎ?４°Ｃ??离心３０ｍｉｎ，上清液即为成虫粗抗原。??图１－１粪便分离Ｉ期幼虫?图１－２中间宿主?图１－３?ＩＩＩ期幼虫??ｉＭｍ??图１－４幼虫?图１－５?（ａ）肺动脉血管分离成虫?（ｂ）成虫??議??图１－６排泄分泌粗抗原制备??１．２．６纯化抗原制备采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）纯化抗原??１．２．６．１?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶的制备按照目的蛋白分子量配制１０％分离胶和５％浓缩??胶，分离胶一般灌注量为４．５ｍＬ，然后用２０〇ｎＬ移液枪快速用纯水压平胶面，室??１３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]2010～2016年大理地区广州管圆线虫病监测病例分析[J]. 李天美,陈凤,方文,陈绍荣,李婷,李科荣,刘榆华,罗家军. 热带病与寄生虫学. 2017(03)
[2]纳米金标记技术应用于病原生物检测的研究[J]. 曹颖,李家萌,赵媛,杨毅梅. 中国病原生物学杂志. 2016(03)
[3]固相金纳米棒光学免疫传感器对血吸虫病早期诊断价值的研究[J]. 何鑫,汪世平,周云飞,黄成铭,吴朝阳,沈国励. 中国病原生物学杂志. 2015(10)
[4]胶体金制备技术的改进与优化[J]. 刘颖沙,李建科,张琳,刘美慧. 食品与发酵工业. 2015(11)
[5]环卵沉淀试验在广州管圆线虫病诊断中的应用[J]. 薛士鹏. 中国热带医学. 2014(11)
[6]胶体金免疫层析法检测广州管圆线虫感染小鼠血清特异性抗体的研究[J]. 郝振华,黄慧聪,谭峰,梁韶晖. 中国病原生物学杂志. 2013(11)
[7]广州管圆线虫V期幼虫cDNA表达文库中优势诊断抗原的筛选、鉴定和克隆[J]. 陈婧,杨潇,刘茜,詹希美,何蔼. 热带医学杂志. 2013(01)
[8]免疫标记技术在广州管圆线虫病诊断中的应用进展[J]. 杨毅梅,张霄霄,崔立云,王菲,曹淑祯. 大理学院学报. 2012(09)
[9]PCR及其衍生技术在广州管圆线虫检测中的应用[J]. 崔立云,张霄霄,李锟华,杨毅梅. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(04)
[10]纳米金粒子的理化性质、制备及修饰技术和应用研究现状及进展[J]. 袁帅,刘峥,马肃. 材料导报. 2012(09)
博士论文
[1]基于金纳米颗粒标记的ICP-MS病原细菌检测方法及应用研究[D]. 王秀季.中国地质大学 2017
硕士论文
[1]纳米金棒的优化聚合及应用于血吸虫病检测的基础研究[D]. 李家萌.大理大学 2017
[2]纳米金棒标记旋毛虫诊断抗原的筛选及应用于血清学诊断的研究[D]. 曹颖.大理大学 2017
本文编号：3571419
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