人呼吸道合胞病毒核蛋白、磷蛋白和M2-1蛋白的表达及鉴定

发布时间：2022-01-23 09:29

　　目的构建含有人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus,hRSV）核蛋白（nucleoprotein,N）、磷蛋白（phosphoprotein,P）和转录延长/终止抑制因子（transcription elongation/antitermination factor M2-1,M2-1）蛋白编码基因的表达载体,并转染BSR T7/5细胞,鉴定蛋白的表达。方法根据hRSV兰州株（LZ01/09）的N、P和M2-1基因序列设计3对特异性引物,以pcDNA-N、pcDNA-P和pcDNA-M2-1质粒为模板,PCR扩增N、P和M2-1基因片段,与pGEM-T载体连接,构建亚克隆载体;再通过体外酶切连接将内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site,IRES）序列克隆至p RSV7载体T7启动子表达盒基因的上游,构建基本表达载体p7IK;通过酶切连接构建表达载体p7IK-N、p7IK-P和p7IK-M2-1,转染BSR T7/5细胞,采用Western blot法鉴定蛋白的表达。结果亚克隆载体、基本表达载体和表达载体... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2019,32(11)CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞及质粒
    1.2 主要试剂
    1.3 引物设计及合成
    1.4 N、P、M2-1基因的扩增及克隆
    1.5 基本表达载体的构建
    1.6 表达载体的构建
    1.7 细胞转染及蛋白表达的检测
2 结果
    2.1 亚克隆载体的鉴定
    2.2 基本表达载体的鉴定
    2.3 表达载体的鉴定
3 讨论



本文编号：3604071