降钙素基因相关肽受体单克隆抗体的制备与初步鉴定

发布时间：2022-02-24 19:47

　　目的:制备与鉴定抗降钙素基因相关肽受体（CGRPR）单克隆抗体。方法:构建GST-CGRPR胞外区融合表达载体,诱导表达后经GST亲和层析得到的重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选阳性细胞株,通过腹水制备鼠源单克隆抗体,采用ELISA、SDS-PAGE、Western印迹和抗体分型试剂盒等方法进行分析鉴定。结果:纯化得到的GST-CGRPR胞外区融合蛋白纯度大于90%,筛选到2株针对CGRPR的单克隆抗体1F9、1F10,轻、重链均分别为κ型、IgG1型,细胞上清效价分别为1∶3200、1∶1600,腹水效价都达到105,抗体纯度均达到90%以上,且都以线性表位结合GST-CGRPR,亲和力常数分别为3.95×10^-8、1.49×10^-8mol/L。结论:获得2株具有高亲和力针对CGRPR的单克隆抗体,为偏头痛治疗药物研发奠定了基础。 

【文章来源】：生物技术通讯. 2019,30(06)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 重组质粒构建
    1.3 蛋白表达及纯化
    1.4 动物免疫
    1.5 杂交瘤细胞株建立
    1.6 腹水制备及纯化
    1.7 抗体亚类鉴定及效价测定
    1.8 抗体可变区基因调取
    1.9 抗体特异性鉴定
    1.1 0 抗体亲和力测定
2 结果
    2.1 重组表达载体构建
    2.2 目的蛋白纯化
    2.3 单克隆抗体筛选
    2.4 抗体亚型分析及细胞上清效价测定
    2.5 抗体可变区基因序列分析
    2.6 抗体制备
    2.7 单抗特异性鉴定
    2.8 抗体亲和力常数测定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]治疗偏头痛的创新药物——降钙素基因相关肽抑制剂erenumab[J]. 郎丰山,隋忠国,许鹏飞.  中国医药导刊. 2018(08)
[2]小鼠腹水JWA单克隆抗体的制备鉴定[J]. 李爱萍,陈敏娟,王稀琛,金可心,张红,周建伟.  药物生物技术. 2014(02)
[3]靶向G蛋白偶联受体的高通量药物筛选方法[J]. 李静,谢欣.  国际药学研究杂志. 2012(05)
[4]非竞争性ELISA法测定人源抗HBsAg Fab功能性亲和常数[J]. 郑大勇,罗荣城,韩焕兴.  解放军医学杂志. 2004(02)

硕士论文
[1]我国与全球单克隆抗体药物产业的对比分析及发展趋势预测[D]. 李婷婷.山东大学 2014
[2]人降钙素受体胞外域的表达、复性及活性研究[D]. 沈琴.西北农林科技大学 2014



本文编号：3643396