siRNA干扰CRMP1对大鼠海马神经元突起生长和细胞骨架的影响

发布时间：2022-07-11 11:50

　　目的：探讨坍塌反应调节蛋白1（Collapsin response mediator protein 1, CRMP1）对大鼠海马神经元突起生长和细胞骨架的影响。材料和方法：化学合成3对靶向大鼠海马神经元CRMP1基因的siRNA,通过RT-PCR与实时荧光定量PCR筛选干扰CRMP1表达的siRNA,并用免疫细胞荧光和Western blot检测CRMP1的表达,然后合成5’端标记FAM绿色荧光基团筛选后的siRNA序列,阳离子脂质体转染原代培养大鼠海马神经元,荧光显微镜下观察绿色荧光在神经元内的表达部位并定时追踪神经元突起的生长,共聚焦显微镜观察α-tubulin、CRMP5蛋白的重排与分布,蛋白印记检测α-tubulin、CRMP5蛋白的表达量。结果：（1）转染效率的检测：阳离子脂质体法将FAM标记的阴性对照siRNA瞬时转染大鼠海马神经元,流式细胞仪检测转染效率为52.5%。（2） CRMP1-siRNA的筛选：化学合成3对针对CRMP1基因的siRNAs序列,通过RT-PCR、实时荧光定量PCR、免疫细胞荧光和Western blot成功筛选出1对有效siRNA,其中CRMP... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
1 前言
    1.1 细胞骨架与神经元突起生长
    1.2 CRMPs与神经元突起生长
    1.3 目的和意义
2 材料与方法
    2.1 材料
    2.2 方法
    2.3 统计学分析
3 结果
    3.1 原代培养海马神经元的形态学观察
    3.2 CRMP1基因siRNA的筛选
    3.3 CRMP1-249 siRNA转染大鼠海马神经元
4 讨论
    4.1 CRMP1 siRNA的筛选
    4.2 干扰CRMP1基因表达对海马神经元突起生长的影响
    4.3 CRMP1通过调控细胞骨架参与神经元突起生长
    4.4 CRMP1参与突起生长与CRMP5的关系
5 结论
参考文献
英文缩略词表
在校期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]CRMP-1真核表达载体的构建及其突起生长抑制作用[J]. 郭国庆,辛莉,邱小忠,沈伟哉,原林.  生物化学与生物物理进展. 2009(03)
[2]微管的生物学特性与药物研究[J]. 李建农,蒋建东.  药学学报. 2003(04)



本文编号：3658110