黑龙江立克次体感染BALB/c小鼠的致病性研究

发布时间：2022-07-11 14:33

　　黑龙江立克次体（Rickettsia heilongjiangensis）属于斑点热群立克次体（spotted fever group rickettsiae,SFGR）,是远东斑点热（Far-eastern spotted fever, FESF）的病原体。黑龙江立克次体为专性胞内寄生的革兰氏阴性小杆菌,在保存宿主蜱中经卵传播,通过蜱的叮咬感染人。远东斑点热主要分布在我国的东北地区、俄罗斯的远东地区以及日本部分地区,在这些地区,从病人和不同种类的蜱中都分离到了黑龙江立克次体,说明该病为该地区重要的新发传染病。本研究通过空斑纯化获得黑龙江立克次体的单克隆菌株,使用Vero细胞扩大培养立克次体,通过泛影葡胺密度梯度离心纯化菌体,通过实验感染BALB/c小鼠,研究不同时相小鼠血液以及主要器官的立克次体的载量、病理损伤以及细胞因子水平,建立了黑龙江立克次体的BALB/c小鼠感染模型,为进一步揭示黑龙江立克次体的致病机制奠定了基础。将冷冻保藏的黑龙江立克次体接种鸡胚进行复苏,并通过空斑法对黑龙江立克次体进行克隆。随后,将克隆的立克次体在Vero细胞中大量繁殖和采用泛影葡胺不连续密度梯度离心法从... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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缩略词表
摘要
Abstract
前言
第一章 黑龙江立克次体的培养与纯化
    1 材料
        1.1 菌株和鸡胚
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 主要试剂的配制
    2 方法
        2.1 菌种复苏
        2.2 Gimenez 染色法鉴定立克次体
        2.3 间接免疫荧鉴定立克次体
        2.4 空斑克隆黑龙江立克次体
        2.5 黑龙江立克次体的分子鉴定
        2.6 Vero 细胞的培养
        2.7 立克次体单克隆菌株扩大培养
        2.8 泛影葡胺不连续密度梯度离心纯化黑龙江立克次体
        2.9 实时荧光定量检测黑龙江立克次体
        2.10 黑龙江立克次体活力测定
    3 结果
        3.1 黑龙江立克次体染色结果
        3.2 空斑克隆黑龙江立克次体
        3.3 黑龙江立克次体的鉴定
        3.4 黑龙江立克次体在Vero 细胞上培养
        3.5 泛影葡胺不连续密度梯度法纯化黑龙江立克次体
        3.6 实时荧光定量检测黑龙江立克次体
        3.7 黑龙江立克次体活力测定结果
    4 讨论
第二章 黑龙江立克次体感染BALB/c 小鼠的研究
    1 材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
    2 方法
        2.1 实验感染BALB/c 小鼠
        2.2 实验样品取材
        2.3 组织总DNA 的提取
        2.4 组织总RNA 的提取与逆转录
        2.5 组织病理观察
        2.6 荧光定量PCR 检测小鼠样本中立克次体
        2.7 荧光定量PCR 检测小鼠组织中IFN-γ、TNF-α、RANTES 的转录水平
        2.8 间接免疫荧光检测小鼠血清特异性抗体水平
        2.9 统计方法
    3 结果
        3.1 病理损伤分析
        3.2 小鼠血液和器官中立克次体载量分析
        3.3 荧光定量PCR 分析小鼠组织中IFN-γ、TNF-α、RANTES 的转录水平
        3.4 间接免疫荧光分析小鼠血清特异性抗体水平
    4 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
代表性论著
个人简历
致谢



本文编号：3658339