TIG-Fc真核表达载体的构建及其对自然杀伤细胞功能的影响

发布时间：2022-07-15 16:34

　　T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域[T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motif （ITIM） domain,TIGIT]是一种新型的免疫抑制性受体,在机体的免疫调节网络中扮演着重要角色。为了进一步探究TIGIT对自然杀伤（natural killer,NK）细胞的免疫调节功能,构建了融合蛋白TIGIT胞外段（即TIGIT第1～135位氨基酸,以保留功能结构域Ig V区,此胞外段简称为TIG）-人免疫球蛋白G3（immunoglobulin G3,Ig G3） Fc段的真核表达载体,并对TIG-Fc融合蛋白的表达及其对NK-92细胞功能的影响进行了初步研究。利用分子生物学方法,将携带人TIG与人Ig G3 Fc段的基因融合,然后插入真核表达载体pc DNA3.1（-）中,以构建重组质粒pc DNA3.1（-）-TIGFc。随后将重组质粒转染至人胚肾细胞HEK-293T中,通过流式细胞仪和Western blot检测TIG-Fc融合蛋白在293T细胞中的表达;再将重组质粒转染至... 

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 pcDNA3.1(-)-TIG-Fc真核表达载体的构建
    1.3 细胞培养和转染
    1.4 流式细胞仪检测
    1.5 Western blot法检测
    1.6 细胞增殖实验
    1.7 ELISA检测
    1.8 数据统计分析
2 结果与分析
    2.1 pcDNA3.1(-)-TIG-Fc表达载体的构建与鉴定
    2.2 TIG-Fc融合蛋白在293T细胞中的表达
    2.3 Western blot法鉴定转染细胞系中融合蛋白的表达
    2.4 TIG-Fc对NK细胞增殖的影响
    2.5 TIG-Fc对NK-92细胞分泌IFN-γ水平的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]系统性红斑狼疮患者外周血NK细胞TIGIT的表达和意义[J]. 李雪,黄自坤,邓桢,罗清.  免疫学杂志. 2018(07)
[2]树鼩γ干扰素在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性鉴定[J]. 丁晨,肖红剑,龙琼,李智华,毕研伟,闫玲梅,李育中,姚月婷,寸韡.  生物技术通讯. 2018(03)
[3]小鼠分泌型TIGIT慢病毒载体的构建及其功能研究[J]. 陈茜,高义,黄敏,阿孜古丽·艾海提,陈忠华,刘喆隆,余学锋,何文涛.  现代免疫学. 2014(01)
[4]一种新的免疫抑制性受体TIGIT[J]. 方亮,陈丽华,金伯泉.  细胞与分子免疫学杂志. 2012(01)
[5]MTT、MTS、WST-1在细胞增殖检测中最佳实验条件的研究[J]. 李红艳,夏启胜,徐梅,房青,徐波,陈志华,向青.  中国康复医学杂志. 2005(11)



本文编号：3662427