兔软骨细胞的分离及其与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜共培养实验研究

发布时间：2022-07-20 14:17

　　目的探讨体外分离兔软骨细胞的方法并观察其与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜共培养时的生物活性。方法取4周龄的新西兰大耳兔,处死后在无菌条件下取关节软骨。通过胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化软骨细胞。倒置相差显微镜下观察软骨细胞特点,制作细胞爬片行甲苯胺蓝染色。将第3代兔软骨细胞与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜共培养,噻唑蓝（MTT）法和糖胺聚糖含量测定法检测软骨细胞在胶原膜上的细胞活性,扫描电镜观察软骨细胞在复合胶原膜上的生长情况。结果分离出的原代软骨细胞初为卵圆形,贴壁后变成三角形或多边形,可被甲苯胺蓝染色。软骨细胞在Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜上生长良好。结论两部酶法可获得大量软骨细胞,MTT法和扫描电镜证实软骨细胞可在复合胶原膜上正常扩增。 

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料与试剂
    1.2 实验方法
        1.2.1兔关节软骨细胞的分离、培养、传代
        1.2.2软骨细胞爬片甲苯胺蓝染色
        1.2.3Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜与软骨细胞共培养之前的消毒、浸泡
        1.2.4 MTT法检测软骨细胞在Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜上的细胞活性
        1.2.5糖胺聚糖水平检测
        1.2.6扫描电镜观察软骨细胞与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜复合物
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 软骨细胞形态及存活率
    2.2 软骨细胞爬片甲苯胺蓝染色
    2.3MTT法检测软骨细胞在Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜上的细胞活性
    2.4 糖胺聚糖水平检测
    2.5 扫描电镜观察软骨细胞与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜复合物
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]乳兔关节软骨细胞的分离、培养及生物学特性的观察[J]. 刘雷,韦庆军,陈管雄,谢伟,陈欢.  广西医科大学学报. 2014(03)
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[3]关节软骨细胞体外培养及生物学特性的实验研究[J]. 赵明,陈竹,张旭乾,刘康,冯刚,刘丽华,韩小伟.  川北医学院学报. 2013(02)
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[5]兔膝关节软骨细胞的分离培养及形态学特征[J]. 胡志俊,胡波,唐德志,张有为,王世伟,王拥军.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(46)
[6]胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶消化获取关节软骨细胞[J]. 刘明东,盛天金,王万宗.  中国组织工程研究与临床康复. 2010(46)
[7]兔关节软骨细胞的分离、培养和形态学特征[J]. 张志光,郑卫平,苏凯,许跃.  中山大学学报(医学科学版). 2004(01)



本文编号：3664150