结核分枝杆菌PPE68蛋白的表达及初步应用

发布时间：2022-08-12 12:43

　　目的:构建结核分枝杆菌PPE68基因原核表达质粒和真核表达质粒载体,分别在大肠杆菌BL21和小鼠巨噬细胞株RAW264.7中观察PPE68基因表达。并将在大肠杆菌BL21中表达的PPE68蛋白,用亲和层析法分离纯化后,皮下多点注射法免疫新西兰大白兔,制备兔抗rPPE68多克隆抗体,为进一步探讨PPE68蛋白的功能及PPE68重组BCG的构建打下基础。方法:1以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,用PCR法扩增PPE68基因,将其克隆至pET32a（+）载体中,构建重组原核表达质粒pET32a（+）/PPE68,热休克法转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定。2将结核分枝杆菌PPE68基因克隆至真核表达质粒pBudCE4.1中,构建真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68。以真核表达质粒pBudCE4.1-PPE68体外转染小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,通过RT-PCR及Western-blot法分别在转录水平及翻译水平检测PPE68基因的表达。3以纯化后重组PPE68蛋白为抗原,与弗氏不完全佐剂等体积混合,采用... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
英汉缩略语名词对照
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 结核分枝杆菌 PPE68 基因原核表达载体的构建和表达及鉴定
    1 材料和方法
    2 实验结果
    3 讨论
    4 小结
第二部分 PPE68 真核表达载体构建及细胞内表达鉴定
    1 材料和方法
    2 实验结果
    3 讨论
    4 小结
第三部分 PPE68 蛋白抗血清的制备及鉴定
    1 材料和方法
    2 实验结果
    3 讨论
    4 小结
全文总结
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
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【参考文献】：
期刊论文
[1]原核融合表达载体的设计、构建及应用[J]. 程琰,毛旭虎,王庆旭,余抒,刘艳青,张晓丽,宁亚蕾,邹全明.  免疫学杂志. 2008(06)
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[4]可溶性血管细胞黏附分子1在肺结核发病机制中的作用和临床意义[J]. 梁艳,董德琼,杨渝浩.  中华结核和呼吸杂志. 2006(04)



本文编号：3675900