抗Aβ42低聚体的单链抗体的功能与机制研究

发布时间：2022-09-17 19:18

　　阿尔茨海默氏病（Alzheimer’s disease,AD）是一种神经退行性疾病,其高发人群主要是中老年人,预计到2050年全世界有超过1.315亿的痴呆症患者。AD最重要的病理特征是老年斑和神经纤维缠结（NFTs）,前者是Aβ肽的细胞外聚集体,后者是细胞内超磷酸化微管相关蛋白Tau蛋白的聚集体。AD病因及发病机制至今尚有争论,近些年各种假说中最有影响力的是淀粉样蛋白级联假说。该假说认为AD的起始事件是淀粉样前体蛋白在被分泌酶切割降解过程中产生多的Aβ42,接着引起一系列病理学变化,进而导致AD的发生。该理论最初认为神经元功能障碍和死亡是由总Aβ的含量的神经毒性作用导致的,最近有人提出,不仅Aβ肽单体导致神经元功能障碍,Aβ肽的低聚形式（2至12个肽的小聚集体）实际上比Aβ高聚形式（例如老年斑）对脑功能有更大的损害。本课题组在前期研究中获得了两种抗Aβ42低聚体的单链抗体MO6和HT7,分析结果表明,单链抗体MO6和HT7均能特异性识别Aβ42的寡聚体和原纤维形态,且能够抑制Aβ42的进一步聚集和促进Aβ42聚集体的解聚,对Aβ42产生的神经毒性有明显的抑制作用,但是MO6和HT7对... 

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词
第一章 前言
    1.1. 阿尔茨海默氏病
    1.2. 临床症状和神经病理学
    1.3. 淀粉样前体蛋白（APP）加工的分子机制及Aβ 肽和聚集体的形成
    1.4. 遗传因素
    1.5. AD的诊断和治疗
    1.6. 单链抗体（sc Fv）
    1.7. 本论文的研究思路
第二章 Aβ42 及其单链抗体的制备
    2.1. 引言
    2.2. 实验材料
        2.2.1. 菌种
        2.2.2. 试剂
        2.2.3. 仪器
    2.3. 实验方法
        2.3.1. 编码单链抗体HT7的VH、VL的基因扩增
        2.3.2. 编码单链抗体HT7的VL的DNA片段与原核表达载体的连接
        2.3.3. 编码单链抗体HT7的VH的DNA片段与原核表达载体的连接
        2.3.4. 重组质粒的转化
        2.3.5. 阳性菌株筛选及鉴定
        2.3.6. 目的蛋白的诱导表达与纯化
        2.3.7. Aβ 的制备
    2.4. 实验结果
        2.4.1. 单链抗体HT7的VL和VH结构域的表达载体构建
        2.4.2. 单链抗体HT7及其VL和VH结构域的表达及纯化
        2.4.3. Aβ 的制备
    本章小结
第三章 抗Aβ42 寡聚体特异性单链抗体的性质与功能分析
    3.1. 引言
    3.2. 实验材料
        3.2.1. 材料
        3.2.2. 试剂
        3.2.3. 仪器
    3.3. 实验方法
        3.3.1. 单链抗体与四种形态Aβ42 结合特异性的分析
        3.3.2. 单链抗体对Aβ42 寡聚体（表观）结合力的检测
        3.3.3. 单链抗体对Aβ 寡聚体（表观）亲和力的测定
        3.3.4. 单链抗体对Aβ42 聚集的抑制作用的分析
        3.3.5. 单链抗体抑制Aβ42 对细胞的毒性作用的检测
        3.3.6. 单链抗体与Aβ42 相互作用的分析
    3.4. 实验结果
        3.4.1. 单链抗体对Aβ42 不同形态的特异性
        3.4.2. 单链抗体对Aβ42 寡聚体的（表观）结合力
        3.4.3. 单链抗体的（表观）亲和力的测定
        3.4.4. 单链抗体对Aβ42 聚集的抑制作用
        3.4.5. 单链抗体抑制Aβ42 对细胞的毒性作用
        3.4.6. 单链抗体HT7的VH、VL结构域与Aβ42 相互作用分析
    本章小结
结论与讨论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]淀粉样前体蛋白基因的分子遗传学和分子生物学[J]. 楼蓉,梅品超,朱宁,沈岩.  国外医学.遗传学分册. 2001(03)



本文编号：3679797