HepG2细胞中线粒体形状的动态变化

发布时间：2022-10-10 11:11

　　目的:研究HepG2细胞中线粒体形状动态变化过程中的功能变化及其初步分子机制。方法:HepG2细胞经过HBSS缓冲液饥饿处理后,使用线粒体氧化磷酸化解偶联剂CCCP、脂肪酸受体GPR40/120激动剂GW9508、脂肪酸油酸OA和钙离子载体Ionomycin等4种不同药物处理,通过共聚焦显微镜观察和流式细胞分析的手段检测细胞中线粒体形状和功能发生的改变。然后,通过基因沉默Drp1,Mff或者Fis1蛋白,初步研究调控线粒体形状改变的分子机制。结果:经过CCCP和GW9508处理细胞中产生甜甜圈线粒体,而OA和Ionomycin处理产生球状线粒体。CCCP,OA和Ionomycin使线粒体去极化,CCCP、GW9508、OA或者Ionomycin单独处理在一定程度上影响细胞中活性氧化簇ROS。甜甜圈线粒体产生由Drp1介导,而球状线粒体形成依赖于Drp1和Mff。结论:线粒体的形态与其功能相互联系,Drp1和Mff蛋白对于细胞线粒体形状动态改变过程中形状的调整和适应具有很重要的作用。 

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【文章目录】：
前言
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 试验材料
        1.1.2 试验仪器
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养和饥饿处理
        1.2.2 细胞转染
        1.2.3 细胞固定和免疫荧光
        1.2.4 电镜
        1.2.5 实时荧光定量PCR
        1.2.6 si RNA序列
        1.2.7 流式细胞分析
        1.2.8 图像处理
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 甜甜圈线粒体和球状线粒体的产生
    2.2 甜甜圈线粒体和球状线粒体形成时间存在差异
    2.3 四种药物处理对活性氧化簇和线粒体膜电位的影响
    2.4 Drp1和Mff参与调控线粒体形态
3 讨论



本文编号：3689514