载脂蛋白E基因敲除小型猪的建立及肝脏表型分析

发布时间：2022-12-10 01:50

　　在我国尤其是北方城市,心脏血管疾病有着非常高的发病率和致死率,这和环境及民众的饮食结构有很大关系。动脉粥样硬化是以冠心病、脑梗死等心血管疾病的主要诱因,主要由脂质代谢紊乱造成。动脉粥样硬化不仅和脂质代谢、炎症反应相关,而且和高胆固醇血症的关系十分密切。动脉粥样硬化属于慢性病,诱发因素较多,一旦发病严重时可以致命。1973年人们在超低密度脂蛋白中发现了载脂蛋白E在血浆脂蛋白代谢中具有重要作用,可以调节酶活性、运输脂质、引导血浆脂蛋白同细胞表面受体结合。ApoE的多态性不仅可以影响其结合脂质能力,而且和神经退化疾病、心血管动脉粥样硬化疾病有相关性,且不同亚型对疾病的易感性也不同。ApoE和疾病的关系在动物身上研究较为广泛,如apoE基因敲除鼠和apoE基因敲除兔的胆固醇水平都显著升高,可以发展为高脂蛋白血症、动脉粥样硬化。但是这些转基因动物模型也并是完美的动脉粥样硬化模型。鼠模型体积过小,不适合采样和外科手术操作,而且脂蛋白以HDL为主,对动脉粥样硬化有保护作用;兔子模型虽然易于操作,但对饮食敏感,而且缺少肝脏酶活性,长期高胆固醇饮食会导致肝脏中毒,斑块损伤位置和人类也不同。如果能建立体积... 

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
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引言
第一篇 文献综述
    第1章 载脂蛋白E基因功能
        1.1 ApoE的多态性
        1.2 ApoE的结构和功能
        1.3 ApoE在正常脂蛋白代谢中的作用
        1.4 ApoE亚型调节脂质水平的作用
    第2章 载脂蛋白E和动脉粥样硬化
        2.1 ApoE和动脉粥样硬化
        2.2 ApoE基因敲除动物模型
    第3章 基因编辑技术概况
        3.1 基因编辑发展史
            3.1.1 Cre-lox
            3.1.2 锌指核酸酶(ZincFingerNucleases)
            3.1.3 TANLENs
        3.2 CRISPR
            3.2.1 CRISPR/Cas:天然免疫系统
            3.2.2 CRISPR/Cas9的应用
            3.2.3 CRISPR/Cas9技术的生物安全性
第二篇 研究内容
    第1章 CRISPR/CAS9介导的载脂蛋白E基因敲除猪的建立
        1.1 材料
            1.1.1 细胞系及实验动物
            1.1.2 质粒
            1.1.3 主要试剂及试剂盒
            1.1.4 主要试验仪器
            1.1.5 所用软件
        1.2 方法
            1.2.1 sgRNA表达载体的构建
            1.2.2 验证sgRNA切割效率
            1.2.3 挑取单克隆细胞
            1.2.4 筛选阳性克隆
            1.2.4 阳性细胞核移植和胚胎移植
        1.3 结果
            1.3.1 PX330-sgRNA载体的鉴定
            1.3.2 sgRNA切割效率鉴定
            1.3.3 鉴定apoE基因敲除效率
            1.3.4 阳性克隆细胞筛选
            1.3.5 核移植和胚胎移植
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 克隆猪载脂蛋白E鉴定与肝脏表型分析
        2.1 材料
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 实验仪器
            2.1.3 动物材料
        2.2 方法
            2.2.1 基因型鉴定
            2.2.2 肝脏蛋白检测
            2.2.3 肝脏脂质含量检测
        2.3 结果
            2.3.1 克隆猪apoE基因型鉴定
            2.3.2 克隆猪apoE表型鉴定
            2.3.3 肝脏脂质含量检测
            2.3.4 肝脏脂质调节因子检测
            2.3.5 肝脏炎症因子检测
        2.4 讨论
        2.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]人和猪、羊、牛肌组织形态的比较及法医学意义[J]. 楼旭鹏,张伟,郑剑,徐宏,赵峰.  法医学杂志. 2016(04)
[2]载脂蛋白E基因多态性与原发性高脂血症中医辨证的相关性研究[J]. 蒋卫民,唐蜀华,赖仁胜,谢玲,王石.  中国中西医结合杂志. 2006(01)
[3]载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的应用[J]. 刘龙涛,张文高,郑广娟.  山东生物医学工程. 2002(04)
[4]载脂蛋白E基因多态性对血脂水平的影响及与冠状动脉狭窄的关系[J]. 李卫华,黄德嘉,杜修海,张卫泽,胡静泠.  中国动脉硬化杂志. 2000(01)
[5]载脂蛋白E[J]. 张大高,孙振威.  生命的化学(中国生物化学会通讯). 1987(05)



本文编号：3715813