新型H7N9禽流感病毒NA蛋白胞外区片段的生物信息学分析及其多克隆抗体制备

发布时间：2022-12-10 23:11

　　旨为以原核表达系统表达、纯化新型H7N9禽流感病毒（安徽株）NA蛋白胞外区片段并制备该蛋白的多克隆抗体。对新型H7N9禽流感病毒神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）蛋白胞外区片段进行生物信息学分析,基于大肠杆菌密码子偏爱性进行密码子优化并合成该蛋白编码基因。将构建的重组质粒pET28b-tN9（Truncated N9）转化至E. coli BL21（DE3）、E. coli Rosetta和E. coli Arctic Express（DE3）,进行诱导表达,并进行SDS-PAGE鉴定。选取E. coli BL21（DE3）重组菌进行放大培养、IPTG诱导并对诱导产物进行镍柱纯化、SDS-PAGE分析和质谱鉴定。将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以Western blotting和间接ELISA法检测抗体特异性及效价。成功表达并纯化目标蛋白,Western blotting显示制备的多克隆抗体能特异性识别重组蛋白和新型H7N9禽流感病毒（上海株）,间接ELISA方法检测制备的多克隆抗体,效价为1∶256 000。利用原核表达系统高效表达并纯化了tN9蛋白,制... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 新型H7N9禽流感病毒NA蛋白胞外区片段的生物学信息分析
        1.2.2目标基因表达载体的构建
        1.2.3目的蛋白的诱导表达、亲和纯化与质谱鉴定
        1.2.4 动物免疫与多克隆抗体制备
        1.2.5 Western blotting法鉴定多抗特异性
        1.2.6 间接ELISA法测定多克隆抗体的效价
2 结果
    2.1 NA蛋白胞外区片段生物信息学分析结果
    2.2 pET28b-tN9重组表达载体构建
    2.3 目的蛋白的诱导表达
    2.4 目的蛋白亲和纯化与质谱鉴定
    2.5 Western blotting法鉴定多抗特异性
    2.6 多克隆抗体的效价检测
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
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[3]羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备[J]. 陈慧芹,王小平,罗树红,王丽洁,陈倩倩,郝文波.  生物技术通报. 2017(07)
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[5]细粒棘球绦虫转酮醇酶生物信息学分析[J]. 张耀刚,曹得萍,李超群,樊海宁.  中国病原生物学杂志. 2017(03)
[6]猪带绦虫TSO45W-4B基因的克隆、表达和抗体制备[J]. 周必英,周泠,刘美辰,刘晖,张曦.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2013(05)



本文编号：3717691