基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因快速检测方法的建立

发布时间：2022-12-22 19:41

　　目的应用环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）建立针对溶藻弧菌gyrB基因的快速检测方法。方法以溶藻弧菌标准株（ATCC-17749）和溶藻弧菌野生株（WT）为研究对象,通过在线生物学软件（http://primerexplorer.jp/e/）设计针对溶藻弧菌gyrB基因的LAMP引物,利用恒温水浴进行等温扩增,优化反应条件,建立快速检测方法。结果①经2g/dl凝胶电泳结果显示反应温度为61℃时扩增产物成像效果较60℃,62℃和63℃明显,为适宜反应温度;②在61℃条件下反应60 min和90 min凝胶电泳成像效果差异不大,反应时间为60 min能满足扩增需要;③利用同一体系对临床6种其它常见致病菌进行等温扩增时未出现阳性条带,提示整个体系特异度较好;④采用模板稀释法验证该LAMP体系检测的灵敏度为10-4mg/L。结论建立了基于LAMP技术针对溶藻弧菌gyrB基因的快速检测方法,具有良好的特异度和敏感度,对快速检测溶藻弧菌有重要意义。 

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 研究对象
    1.2 试剂和仪器
    1.3 方法
        1.3.1 细菌核酸粗提物制备：
        1.3.2 LAMP反应体系：
        1.3.3 反应温度的优化：
        1.3.4 反应时间的优化：
2 结果
    2.1 不同温度下扩增效果的比较
    2.2 不同反应时间扩增效果的比较
    2.3 特异性评价
    2.4 灵敏度评价
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Taqman-探针荧光定量PCR鉴定溶藻弧菌方法的建立[J]. 陈昌国,侯兵兵,陈秋圆,郭建巍,赵强元.  实用检验医师杂志. 2017(01)
[2]LAMP技术在动物病毒病原检测中的应用进展[J]. 周广舟,徐苏丽,谭晓荣,陈小兵.  中国人兽共患病学报. 2013(02)
[3]中国海域海洋细菌分布特征分析[J]. 马聪,陈昌国,蒋学兵,李丹丹,刘敏,郝秀红,马学斌,钱扬会.  解放军医学杂志. 2012(09)
[4]溶藻弧菌对水产动物致病性及其防治的研究进展[J]. 苑淑宾,朱爱意.  浙江海洋学院学报(自然科学版). 2012(03)
[5]溶藻弧菌TaqMan实时PCR快速检测体系的建立[J]. 王海波,张京云,王多春,阚飙.  中国卫生检验杂志. 2011(05)
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本文编号：3723920