运用CRISPR/cas9基因编辑技术敲除Tshr基因构建CH大鼠模型的研究

发布时间：2023-03-29 23:02

　　先天性甲状腺功能减症(Congenital Hypothyroidism CH)是一种新生儿常见的内分泌代谢性疾病,临床表现为患儿体格发育迟滞和智能发育严重障碍。正是因为其高发病率且可导致机体多个器官的发育迟滞,所以我们有必要进一步深入研究CH影响器官正常发育的作用机制。由于伦理学问题,人类不可能在对CH患者做出诊断后不进行治疗而继续进行研究,所以在体研究只能依靠CH动物疾病模型。但因为目前世界上缺乏基因敲除的CH大鼠模型,所以研究者获取CH大鼠模型都是通过药物诱导的,而这显然无法真正模拟由于基因突变所造成的CH对大鼠机体发育的影响,所以通过敲除调控甲状腺发育或者甲状腺激素合成的相关基因以构建CH大鼠模型成为了CH深入研究的必要前提。本项研究在世界上首次运用CRISPR/cas9基因编辑技术通过敲除促甲状腺激素受体(Tshr)基因成功构建了CH大鼠疾病模型,为今后最终明确甲状腺激素在器官发育过程中的作用机制以及CH的病理机制提供了研究基础。研究主要内容:一、目的质粒的构建和RNA体外转录:将pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9质粒(add...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 CH治疗的研究进展与存在的问题
    1.3 CH动物模型存在的问题
    1.4 基因编辑技术的选择问题
第2章 目的质粒的构建，转染细胞效率验证及体外转录
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要实验试剂
        2.1.2 实验方法
    2.2 结果
        2.2.1 目的载体的构建
        2.2.2 BRL细胞转染实验
        2.2.3 gRNA和cas9RNA体外转录
    2.3 讨论
第3章 受精卵显微注射和移植
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 受精卵与假孕母鼠准备
        3.2.2 受精卵显微注射和移植
    3.3 讨论
第4章 基因型鉴定及脱靶情况分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验方法
    4.2 实验结果
        4.2.1 基因型分析
        4.2.2 脱靶情况分析
    4.3 讨论
第5章 表型观察及激素测定
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验方法
    5.2 结果
        5.2.1 体重
        5.2.2 T4,T3,TSH激素检测
    5.3 讨论
第6章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 进一步工作的方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3774671