脂多糖对人脐带间充质干细胞凋亡的影响及调控机制的研究

发布时间：2023-04-22 22:55

　　目的：通过组织块法分离培养人脐带间充质干细胞(human umibilical cordmesenchymal stem cells, hUCMSCs)，并用不同浓度脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激细胞，探讨LPS对hUCMSCs细胞增殖、凋亡的影响及其调控机制。研究低浓度LPS预处理对hUCMSCs的适应性保护作用，并探讨其潜在机制，为增强hUCMSCs的内毒素耐受性提供理论基础。 方法：1利用组织块法从足月儿脐带中分离培养hUCMSCs。倒置显微镜观察细胞形态；MTT法检测第3、5、10代细胞增殖活性；免疫荧光染色法测定细胞表面标记物。 2采用不同浓度LPS（0、0.01、0.1、1.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0μg/ml）刺激hUCMSCs。MTT法检测细胞增殖活性；AO/EB染色法及流式细胞术（flowcytometry, FCM）检测细胞凋亡情况；酶联免疫吸附法（enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA）检测Caspase-8、Caspase-3活性及DNA片段。 3低浓度LPS（0.1...

【文章页数】：108 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文缩略词表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 脂多糖对人脐带间充质干细胞增殖及凋亡生物特性的影响
    第一节 人脐带间充质干细胞分离、培养及生物学特性检测
        材料与方法
            一 主要试剂
            二 实验室试剂配制
            三 主要仪器
            四 实验标本
            五 分离、培养方法
            六 细胞形态学观察
            七 MTT 比色法检测 hUCMSCs 的增殖情况
            八 免疫荧光染色检测细胞表面标志物
        结果
            一 细胞形态学观察
            二 MTT 比色法检测 hUCMSCs 的增殖情况
            三 免疫荧光检测细胞表面标记物
        讨论
        结论
        参考文献
    第二节 脂多糖对人脐带间充质干细胞增殖及凋亡的影响
        材料与方法
            一 主要试剂
            二 实验室试剂配制
            三 主要仪器
            四 细胞培养及因素处理
            五 指标检测及方法
            六 统计学处理
        结果
            一 MTT 比色法检测不同浓度 LPS 刺激对 hUCMSCs 增殖的影响
            二 AO/EB 染色定性观察不同浓度 LPS 刺激对 hUCMSCs 凋亡的影响
            三 流式细胞仪定量检测不同浓度 LPS 刺激 hUCMSCs 的凋亡率
            四 z-IETD-FMK 对 hUCMSCs 细胞 Caspase-8、Caspase-3 及凋亡的影响
        讨论
        结论
        参考文献
第二部分 脂多糖预处理增强人脐带间充质干细胞对内毒素耐受性及其作用机制的研究
    第一节 脂多糖预处理对人脐带间充质干细胞凋亡的影响
        材料与方法
            一 主要试剂
            二 实验室试剂配制
            三 主要仪器
            四 细胞培养
            五 指标检测及方法
            六 统计学处理
        结果
            一 流式细胞仪检测 LPS 预处理介导的 hUCMSCs 抗凋亡作用
            二 Hoechst 33258 观察 LPS 预处理介导的 hUCMSCs 抗凋亡作用
            三 低浓度 LPS 预处理对 hUCMSCs 细胞存活率的影响
        讨论
        结论
        参考文献
    第二节 脂多糖预处理增强人脐带间充质干细胞内毒素耐受性机制的研究
        材料与方法
            一 主要试剂
            二 实验室试剂配制
            三 主要仪器
            四 细胞培养及因素处理
            五 指标检测及方法
            六 统计学处理
        结果
            一 LPS 预处理对 hUCMSCs 细胞 c-FLIPL表达的影响
            二 si-FLIPL对低浓度 LPS 预处理介导 hUCMSCs 细胞 c-FLIPL表达的影响
            三 si-FLIPL对低浓度 LPS 预处理诱导的抗细胞凋亡的影响
            四 si-FLIPL对低浓度LPS预处理诱导Caspase-8和Caspase-3活性的影响
            五 NF-κB 介导低浓度 LPS 预处理上调 c-FLIPL的表达
        讨论
        结论
        参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章
致谢



本文编号：3798562