鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株的构建及其在压力培养条件下的生长特性研究

发布时间：2023-04-24 23:51

　　目的构建鼠伤寒沙门菌ydiU基因敲除株,并比较敲除株与野生株在不同生存压力条件培养基中的生长曲线,为进一步研究ydiU基因及其编码蛋白YdiU的功能奠定基础。方法以鼠伤寒沙门菌ATCC14028株作为母本PCR扩增含有ydiU基因上下游同源臂和氯霉素抗性片段的线性打靶基因,通过同源重组操作得到ydiU基因敲除株ATCC14028ΔydiU。分别测定敲除株与与野生株在营养限制、氧化应激、缺铁、高盐,高糖、低PH和吲哚等压力培养基中的生长曲线,并对两株细菌的生长特性进行比较。结果经PCR内、外侧鉴定及测序鉴定表明ydiU基因敲除株构建成功。敲除株和野生株在LB培养基中培养6h即对数生长期后期时平均A₆₀₀值分别为0.805和0.894,而在培养时间9h即平台期前期时检测平均值分别为1.022和1.220。两个生长关键期的细菌生长速度均表现为敲除株略为缓慢,但两株菌最终在平台期后期达到相同A值。在限制营养培养基(M9)中,敲除株增殖速度落后于野生株细菌,敲除株培养时间6h、9h和22h的平均A₆₀₀值分别为0.511、0.590和0.693,相同培...

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 菌株与质粒
        1.2 仪器和试剂
    2 方法
        2.1 引物设计合成
        2.2 基因缺失株ATCC14028ΔdiU-Cm的构建
        2.3 基因缺失株ATCC14028ΔydiU的构建
        2.4 测序鉴定
        2.5 ydiU基因敲除菌株压力条件生长曲线测定
            2.5.1 细菌生长压力条件
            2.5.2 生长曲线测定
结果
    1基因缺失株ATCC14028ΔYdiU-Cm和ATCC14028ΔYdiU的鉴定
    2基因敲除株在压力条件下的生长特征
讨论



本文编号：3800274