泛素特异性蛋白酶USP18在HBV病毒感染中的作用及其机制研究

发布时间：2023-05-07 14:30

　　研究背景和目的:乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV),作为一种对人类健康造成极大危害的病原体,常引起人类急慢性传染性病毒性肝炎,并最终可逐渐演变成慢性乙型肝炎、肝硬化、终末期肝病以及肝细胞癌。每年有数十万人死于与慢性乙型肝炎相关联的疾病,对全球公共健康造成了巨大的威胁。Ⅰ型干扰素(Interferonα,IFNα),常规用于慢性乙肝病毒感染患者的治疗,通过诱导数百个干扰素刺激基因(interferon stimulated genes,ISGs)的表达,在抗病毒防御中发挥着至关重要的作用。而这些ISGs中就包括泛素特异性蛋白酶USP18(ubiquitin-specific protease 18,USP18),它是Ⅰ型干扰素信号通路的一种负性调控因子。在干扰素治疗无效的慢性乙肝患者的肝组织中,USP18的表达水平明显增高。然而,USP18是否影响HBV持续性感染以及是否与HBV耐受干扰素有关联尚未完全清楚。因此,本研究的目的在于探索USP18在HBV持续感染中的作用及其潜在机制。实验方法:高转wild type USP18(WT-USP18,或简称为USP18)...

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
一、前言
    (一) 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)
        1. HBV的分子生物学特征
        2. HBV的流行病学特点
        3. 慢性HBV感染的抗病毒治疗
    (二) 干扰素治疗HBV低应答及USP18对干扰素信号通路影响的国内外研究现状与发展趋势
    (三) 研究的技术路线
二、材料与方法
    材料
        (一) 细胞系
        (二) 质粒
        (三) 荧光定量PCR扩增引物
        (三) 主要试剂
        (四) 常用试剂盒
        (五) 主要耗材
        (七) 主要仪器
        (八) 常用试剂的配制
    方法
        (一) 质粒构建
        (二) 细胞培养
        (三) 细胞铺板接种及转染
        (四) 总RNA/DNA的抽提和实时荧光定量PCR
        (五) 蛋白免疫印记试验(Western Blot,WB)
        (六) ELISA
        (七) 双荧光报告基因检测
        (八) 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, CO-IP)
        (九) 统计学分析
三、结果
    第一部分 USP18信号通路对HBV感染的影响
        (一) USP18及其无酶活性突变体C64S在细胞中的表达
        (二) 过表达USP18刺激HBV产生但不依赖于其酶活性
        (三) 过表达USP18抑制IFN诱导的Jak/STAT信号通路
    第二部分 与USP18存在相互作用的HBV病毒蛋白的筛选、鉴定
        (一) HBV各病毒蛋白重组表达质粒的成功构建以及蛋白水平的验证
        (二) 免疫共沉淀(CO-IP)筛选与USP18存在相互作用的HBV病毒蛋白
四、讨论
五、结论
参考文献
英文缩略词
文献综述
    参考文献
致谢
研究生简历



本文编号：3810755