小鼠大脑皮质神经元条件培养基促进MC3T3-E1增殖分化的研究

发布时间：2017-05-21 11:04

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【摘要】：目的：观察小鼠大脑皮质神经元条件培养基对MC3T3-E1增殖与分化的影响,初步探讨其分子机制。材料和方法：取新生24h以内的小鼠进行大脑皮质神经元原代培养,收集第7-10天的条件培养基,将其按不同比例：1：4、1：2、1：1、1.5：1、2：1、4：1加入MC3T3-E1的培养基中培养细胞,分别培养到第1、2、4、7天采用MTT比色法检测MC3T3-E1的增殖；将上述条件培养基按1：1、1：2加入MC3T3-E1的培养基中培养细胞,采用流式细胞仪检测MC3T3-E1的周期；激光共聚焦显微镜下观察MC3T3-E1;通过酶标微板法检测MC3T3-E1分泌的碱性磷酸酶；通过蛋白酶免疫印迹法检测MC3T3-E1的COL I、OPN、 BMP-2的表达；采用茜素红染色法检测MC3T3-E1的矿化结节产生率。结果：(1)不同比例(1：4、1：2、1：1、1.5：1、2：1、4：1)的小鼠大脑皮质神经元条件培养基对MC3T3-E1增殖的影响表现为先增高后降低的趋势,比例为1：1时明显促进MC3T3-E1的增殖,与对照组有统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测出实验组(1：1)的MC3T3-E1处于分裂期(S期+G2M期)的细胞比例增高,与对照组有统计学意义(P0.05)。激光共聚焦显微镜下观察到实验组MC3T3-E1细胞骨架荧光强度较高,经ImageJ软件计算荧光量,差异有统计学意义(P0.05)。(2)实验组ALP和矿化结节产生率高于对照组(P0.05)。Western Blot结果显示实验组在第7天时COL I、BMP-2、OPN表达高于对照组(P0.05)。结论：小鼠大脑皮层神经元所分泌的物质对MC3T3-E1的增殖、分化有明显的直接促进作用。
【关键词】：大脑皮质神经元 条件培养基 Mc3T3-E1 增殖 分化
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R338
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 前言7-11
• 1.1 大脑皮质神经元细胞7
• 1.2 成骨细胞7-9
• 1.3 神经系统与骨组织改建的联系9-10
• 1.4 选题依据与研究思路10-11
• 第二章 小鼠大脑皮质神经元的原代培养与鉴定11-18
• 2.1 引言11
• 2.2 材料和方法11-14
• 2.2.1 材料和仪器11-12
• 2.2.2 实验方法12-14
• 2.3 结果与讨论14-16
• 2.4 小结16-18
• 第三章 小鼠大脑皮质神经元条件培养基的配比及其对MC3T3-E1增殖的影响18-27
• 3.1 引言18
• 3.2 材料和方法18-21
• 3.2.1 材料和仪器18-19
• 3.2.2 实验方法19-21
• 3.3 结果与讨论21-25
• 3.4 小结25-27
• 第四章 小鼠大脑皮质神经元条件培养基对MC3T3-E1分化及矿化的影响27-35
• 4.1 引言27
• 4.2 材料和方法27-31
• 4.2.1 材料和仪器27-28
• 4.2.2 实验方法28-31
• 4.3 结果与讨论31-34
• 4.4 小结34-35
• 第五章 结论35-36
• 参考文献36-40
• 在学期间的研究成果40-41
• 致谢41

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