宿主限制因子BST-2和乙型肝炎病毒相互作用研究

发布时间：2017-05-21 10:07

  本文关键词：宿主限制因子BST-2和乙型肝炎病毒相互作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：宿主限制因子BST-2是一种由干扰素诱导产生的抗病毒糖蛋白，自2008年人们发现BST-2对HIV-1的限制作用以来，BST-2的研究成为了生命科学领域的一大热点。BST-2的主要作用是将包膜病毒截留在感染细胞膜表面抑制病毒的释放。乙型肝炎病毒（HBV）是嗜肝病毒科的一种包膜DNA病毒，在细胞内的多囊泡体进行组装分泌。HBV能引起人类肝脏的急慢性感染和肝脏炎症，发展为肝硬化，同时也是肝细胞癌的一个主要因素。最近有研究报道BST-2还可以影响HIV-1病毒在细胞内部的组装释放，和HBV的组装位置相同，而且BST-2对HBV的释放是否有抑制作用尚不清楚。所以，我们设计实验对BST-2与HBV之间的相互作用进行了研究。 通过总结目前的研究进展，本实验的设计主要包括四个方面，第一是BST-2及其突变体对HBV释放的抑制作用，第二是不同细胞中HBV对BST-2的拮抗作用，第三是HBx与BST-2的相互作用，最后还研究了HBx和BST-2对NF-κB信号通路的调节。通过对实验数据的分析，我们得到了一些明确的实验结果。 在本研究中，向肝细胞和非肝细胞中转染HBV病毒质粒，通过western blot检测蛋白表达量，并且通过ELISA检测HBV抗原。结果表明BST-2与HBV的相互作用具有细胞依赖性。在293T细胞中，，IFN-α诱导产生的和转染的BST-2对HBV都有很强的抑制作用，但是在Huh-7细胞中，外源的BST-2对HBV的抑制作用较弱。在肝细胞中，通过HIV-1ΔVpu与HBV或者病毒蛋白质粒共转染，并超速离心收集上清中的HIV-1病毒颗粒进行western blot检测，我们发现HBV和HBx能促进HIV-1ΔVpu的释放，而在非肝细胞中则没有促进释放的现象，而且Vpu不能有效地恢复BST-2对HBV的抑制作用。部分BST-2突变体对HBV和HIV-1的限制作用也不相同。这些结果说明HBV和HIV-1对BST-2的拮抗作用不完全相同。通过向293T细胞共转染HBx和BST-2质粒，使用western blot检测细胞中蛋白的量，我们观察到BST-2被HBx降解。在质粒共转染后，加入蛋白酶抑制剂，降解作用则受到抑制。在肝细胞中没有观察到降解现象，反而是HBx引起了BST-2在肝细胞内的积聚，总体BST-2的水平升高。这些结果表明HBx和BST-2之间的相互作用也是肝细胞特异性的。之前的研究报道BST-2和HBx能分别激活NF-κB信号通路，在本研究中，向肝细胞和非肝细胞转染了NF-κB报告质粒,通过检测萤光素酶活性，表明了在肝细胞和非肝细胞中BST-2都能激活NF-κB信号通路，但是在肝细胞中HBx对NF-κB信号通路的激活不明显，在非肝细胞中作用较弱。 虽然BST-2抑制HBV释放及其之间相互作用的机制尚不清楚，还需要大量的研究来进一步地阐明，但是我们的研究已经得到了一些初步数据，表明二者之间有一定的联系，这可能会开启宿主细胞抗HBV研究的新领域，为HBV的临床治疗提供新的药物作用靶点。
【关键词】：BST-2 乙型肝炎病毒 HBx NF-κB 干扰素
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373.21
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第1章 前言9-23
• 1.1 BST-2 的研究现状9-13
• 1.1.1 BST-2 的发现及其结构9-10
• 1.1.2 BST-2 的抗病毒功能10-12
• 1.1.3 Vpu 对 BST-2 的拮抗12-13
• 1.2 乙型肝炎病毒的研究简介13-19
• 1.2.1 HBV 简介14-18
• 1.2.2 HBV 的复制周期18-19
• 1.2.3 HBV 感染受体 NTCP 介绍19
• 1.3 NF-κB 信号通路介绍19-21
• 1.3.1 BST-2 调节 NF-κB 信号通路的研究20-21
• 1.3.2 HBV 与 NF-κB 信号通路的研究21
• 1.4 研究目的与设计方案21-23
• 1.4.1 研究目的21
• 1.4.2 实验设计21-23
• 第2章 实验材料与方法23-31
• 2.1 实验材料与试剂23-25
• 2.1.1 工具酶23
• 2.1.2 实验试剂23-24
• 2.1.3 试剂盒24
• 2.1.4 抗体24
• 2.1.5 细胞和菌种24
• 2.1.6 溶液配制24-25
• 2.2 实验仪器25
• 2.3 实验方法25-31
• 2.3.1 质粒构建25-28
• 2.3.2 细胞培养及转染28
• 2.3.3 蔗糖垫超速离心法收获病毒28
• 2.3.4 流式细胞术28-29
• 2.3.5 蛋白电泳与免疫印迹29
• 2.3.6 稳定细胞系构建及检测29
• 2.3.7 ELISA29-30
• 2.3.8 萤光素酶分析法检测 NF-κB 活性30
• 2.3.9 Trizol 法提取细胞总 RNA30
• 2.3.10 逆转录 PCR30-31
• 第3章 实验结果与讨论31-52
• 3.1 BST-2 对 HBV 释放的抑制作用31-48
• 3.1.1 BST-2 对 HBV 释放的抑制作用31-36
• 3.1.2 BST-2 突变体对 HBV 的抑制作用36-38
• 3.1.3 HBV 拮抗 BST-2 的机制可能与 HIV-1 不同38-44
• 3.1.4 IFN-α和 LPS 诱导的 BST-2 抑制 HBV 的作用44-46
• 3.1.5 HBV 感染模型的建立46-48
• 3.2 HBV 对 BST-2 功能调控作用48-52
• 3.2.1 HBV X 蛋白与 BST-2 的相互作用48-50
• 3.2.2 HBV X 蛋白对 BST-2 介导的 NF-κB 信号通路的调节50-52
• 结论52-53
• 参考文献53-61
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果61-62
• 致谢62

【共引文献】

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本文编号：383312