弓形虫ROP18激酶抑制宿主NF-κB信号通路的分子机制研究

发布时间：2017-05-22 11:20

  本文关键词：弓形虫ROP18激酶抑制宿主NF-κB信号通路的分子机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)属于专性细胞内寄生原虫,可感染几乎所有温血动物。弓形虫病是一种呈世界性分布并严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病。弓形虫感染人体多为隐性感染,但在免疫力低下或缺陷的人群如器官移植的病人、长期化疗的癌症患者、AIDS患者等则会出现严重的临床症状。此外,孕期感染可导致胎儿先天性弓形虫病的发生。先天性免疫能够限制弓形虫的增殖并且可以促进宿主产生适应性免疫,这也使得虫体在宿主细胞内长期生存。但是弓形虫能够通过抑制感染细胞的信号通路,进而躲避宿主的先天性免疫反应。刚地弓形虫的毒力因子ROP18在抑制宿主细胞NF-κB信号通路和炎症因子的释放中扮演了重要的角色,深入研究ROP18抑制NF-κB的分子机制具有非常重要的意义。目的：探讨Ⅰ型刚地弓形虫的毒力因子ROP18在抑制宿主细胞NF-κB信号通路中的分子机制,为弓形虫病的发病机制、诊断和防治提供实验和理论依据。方法：通过酵母双杂交筛选人胚胎脑库,发现宿主NF-κB信号通路的p65蛋白与ROP18具有相互作用。并通过GST pull-down和免疫共沉淀实验进一步确认了两者的相互作用。使用电转的方法将ROP18表达质粒导入弓形虫RH株,构建高表达ROP18的转基因虫株。将高表达ROP18的转基因虫株感染HFF细胞,通过免疫荧光来检测ROP18和p65在细胞中的空间位置。构建ROP18缺失突变体的真核表达质粒,通过免疫共沉淀实验了解ROP18对p65功能的影响。用泛素化抗体检测ROP18是否通过泛素化途径来促进p65的降解。结果：(1)弓形虫ROP18和宿主细胞p65存在相互作用。(这部分内容与安然师姐共同完成,为了论文的完整而放在此处。)(2)成功构建过表达ROP18的转基因弓形虫RH株。(这部分内容与安然师姐共同完成,为了论文的完整而放在此处。)(3)弓形虫ROP18和宿主p65在HFF细胞内有共定位。(4)弓形虫ROP18促进宿主p65的降解。(5)弓形虫ROP18通过泛素-蛋白酶体依赖的途径促进宿主p65降解。结论：本研究结果显示,弓形虫ROP18与NF-κB信号通路中的p65蛋白存在相互作用。ROP18蛋白通过泛素-蛋白酶体依赖的途径来促进宿主细胞p65蛋白的降解,从而抑制宿主NF-κB信号通路。本研究有助于了解弓形虫免疫逃逸的分子机制,为弓形虫病的发病机制,免疫诊断以及治疗提供理论基础。
【关键词】：弓形虫 NF-κB信号通路 致病机制
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R382.5
【目录】：

• 英文缩略词对照表5-7
• 中文摘要7-8
• 英文摘要8-11
• 1、前言11-12
• 2、材料与方法12-25
• 3、结果25-35
• 4、讨论35-36
• 5、结论36
• 6.本研究的创新点36
• 7、参考文献36-39
• 附录39-48
• 1、个人简历39-40
• 2、致谢40-41
• 3、综述41-48
• 参考文献45-48

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