hAMSC对小鼠卵巢上皮细胞向卵母细胞样细胞分化的影响

发布时间：2017-05-23 11:15

  本文关键词：hAMSC对小鼠卵巢上皮细胞向卵母细胞样细胞分化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:建立人羊膜间充质干细胞(h AMSC)和小鼠卵巢上皮细胞(OSEC)共培养模型,初步探讨h AMSC对小鼠OSEC向卵母细胞样细胞分化的影响。方法:采用酶消化法和差速贴壁法分离、纯化hAMSC和小鼠OSEC,流式细胞术和免疫细胞化学染色分别鉴定h AMSC和OSEC。应用transwell板,建立h AMSC和小鼠OSEC共培养模型,观察h AMSC对小鼠OSEC细胞形态变化,免疫组化、图像分析与实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测上皮细胞、多能性和生殖细胞标志物的m RNA和蛋白表达。结果:1 P4代h AMSC呈长梭形、漩涡状贴壁生长,流式细胞术鉴定h AMSC高表达CD44、CD90、CD73、CD105,不表达或低表达CD45、CD34、CD19、CD11b和HLA-DR。2免疫细胞化学染色结果显示,传至P2代的小鼠OSEC阳性表达广谱角蛋白Pan-cytokeratin,提示小鼠OSEC为上皮细胞性来源。P3 OSEC与h AMSC共培养组与OSEC单独培养组OSEC均表达上皮角蛋白Pan-cytokeratin阳性,并可表达生殖细胞特异性的标志物Ddx4/MVH和多能性标志蛋白Oct4,且共培养组小鼠OSEC Pan-cytokeratin、Ddx4/MVH、Oct4三种蛋白表达明显高于单独培养组(P0.05)。3 RT-PCR检测结果显示,共培养组小鼠OSEC生殖干细胞特征标志性基因Gdf9、Nanog、Ddx4/MVH m RNA表达量显著高于单独培养组(P0.05),但两组OSEC中均未到ZP基因m RNA的表达。结论:体外培养的小鼠OSEC表达上皮来源标志Pan-cytokeratin及多能性标志蛋白Oct4、Nanong和生殖细胞特征性标志物Ddx4/MVH和Gdf9,表明OSEC可能是一种重要的卵巢干细胞来源;h AMSC与OSEC共培养,可促进OSEC向卵母细胞样细胞分化。
【关键词】：卵巢 生殖干细胞 卵巢上皮细胞 卵母细胞样细胞 人羊膜间充质干细胞
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料与方法10-18
• 结果18-25
• 讨论25-28
• 结论28-29
• 参考文献29-32
• 综述32-42
• 参考文献38-42
• 致谢42-43
• 作者简介43

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 范静;姜宏;殷慧群;汪存利;何瑞冰;;诱导骨髓SSEA-1~+干细胞向卵母细胞分化的初步研究[J];生殖与避孕;2015年08期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张鹤美;小鼠卵巢表面上皮细胞在自发恶性转化过程中间质性及干细胞样特征改变[D];苏州大学;2014年

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本文编号：387781