抗人干扰素-γ单链抗体制备及其免疫检测方法建立

发布时间：2024-02-03 16:22

　　干扰素(Interferon,或IFN)是一种由免疫细胞分泌的促炎症细胞因子,人们目前发现的两大类干扰素包括Ⅰ型和Ⅱ型,其中Ⅱ型IFN(IFN-γ)也被称为免疫干扰素。大量研究表明,IFN-γ在许多疾病的发病机理和进程中起着至关重要的作用,尤其在抗病毒、抗增殖、分化诱导和免疫调节特性方面。此外,IFN-γ被认为是确定疾病特异性免疫反应的重要标志。因此,迫切需要建立一种可行的、准确的方法在实际样品中检测IFN-γ。本研究从NCBI数据库获取并合成了编码人源IFN-γ成熟肽的DNA序列,基因大小为438 bp。PCR扩增获得该基因,通过基因工程方法构建了人源IFN-γ的重组表达载体pET28a-ifn-γ,转化大肠杆菌后经IPTG诱导表达,纯化后获得了分子量大小约20 kDa的重组蛋白。利用纯化的IFN-γ作为抗原免疫小鼠,从免疫小鼠的脾脏中提取总RNA,然后通过反转录PCR获得cDNA,以该cDNA为模版,扩增出抗体的轻、重链可变区VL和VH基因。以(Gly4Ser)3基因为linker,经SOE-PCR组装出scFv序列,并将其构建到噬菌体载体pCANTAB-5E上,转化进宿主菌大肠杆...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２ＴＦＮ－Ｙ蛋白的三级结构示意图??－－

应答中ＮＫ细胞可能起着激活和抑制的双重作用［２５］。ＩＦＮ－ｙ有效地刺激ＮＫ细胞??活化后，可进一步激活机体的抗原呈递功能，在宿主细胞对抗病原体的过程中起??重要作用［２６】，如图１－３所示。当有外界抗原刺激时，ＩＦＮ－ｙ与ＮＫ细胞的循环扩??增可以快速准确地提氺周围组织细胞以及....

图１－３病毒引起的干扰素的拮抗作用示意图［３Ｇ］??Ｆｉｇ．?１－３?Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ?ｏｆ?１ＦＮ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｂｙ?ｆｌａｖｉｖｉｍｓｅｓ??

??Ｗ??图１－２ＴＦＮ－Ｙ蛋白的三级结构示意图??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｅｒｔｉａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＩＦＮ－ｙ??（ｈｔｔｐｓ：／／ｓｗｉｓｓｍｏｄｅｌ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｉｎｔｃｒａｃｔｉｖｅ／ｊｄ２Ｎ４８／ｔｅｍｐｌａｔｅｓ／）??２．３干扰素Ｙ的生物活性?....

图I一基因工程杭体夯奥f}Gl

图ｌ－５基因工程抗体分子结构［４７］??Ｆｉｇ．?Ｉ－５?Ｔｈｅ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ?ａｎｔｉｂｏｄｙ．??．２单链抗体的嗤菌体展示系统??自二十世纪末，ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ等人成功地将具有完整抗原结合能力的ｓｃＦｖ抗体??白展示在....

图２－２?ｚ＞－ｙ的ＰＣＲ扩增??Ｆｉｇ．?２－２?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｉｆｎ－ｙ．??

４结果??４．１人源ＩＦＮ－ｙ全长基因的ＰＣＲ扩增与质粒提取??从数据库中获得人源诉－ｙ全基因序列后（序列如图２－１），本研究通过生物??公司合成出双链ＤＮＡ，由于公司合成的ＤＮＡ量较少，且不带酶切位点，合成基??因回来后，还需要进行ＰＣＲ扩增大量ＤＮＡ，并进行回收。同时，按照质....

本文编号：3894393