microRNA-21对乳鼠心肌细胞凋亡及PTEN/AKT/FOXO3a信号转导通路的影响

发布时间：2024-02-24 00:37

　　背景和目的：心肌细胞(Cardiomyocytes,CMs)凋亡是多种心血管疾病的重要病理生理机制之一。microRNA是真核生物中一种长度约为22个核苷酸大小、参与基因转录后调控的非编码单链小分子RNA，可特异性识别靶信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的3’-非编码区(3’-UTR)并与之结合，从而降解靶mRNA、抑制翻译，发挥其对基因的转录后表达调控，调节重要的细胞活动，参与众多疾病的病理生理过程。在众多微小RNA(microRNA,miRNA)中，微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)不仅在心血管系统中呈高表达，而且还在许多心血管疾病如心肌梗死、心力衰竭、心脏肥大上呈差异性表达，参与各种心血管疾病的病理生理分子机制。迄今为止，研究发现miR-21介导的心血管效应的靶基因有四个，分别是程序性细胞死亡因子4(PDCD4)，磷酸脂酶-张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,PTEN)，Sprouty1(SPRY1)和Sprouty2(S...

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摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 器材的灭菌、去RNA酶处理
        2.2.2 相关液体的配制
        2.2.3 乳鼠心肌细胞的培养及鉴定
        2.2.4 PGC-FU-microRNA-21-GFP慢病毒表达载体的构建
        2.2.5 实验分组
        2.2.6 pGC- FU-microRNA-21-GFP慢病毒载体转染心肌细胞
        2.2.7 利用 TNF-α建立心肌细胞凋亡模型
        2.2.8 心肌细胞总RNA提取及检测总RNA的浓度及纯度
        2.2.9 qRT-PCR测定各组心肌细胞中microRNA-21及PTEN mRNA的表达
        2.2.10 心肌细胞总蛋白的提取及测定蛋白浓度
        2.2.11 Westernblot法检测心肌细胞的PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表达
        2.2.12 心肌细胞增值及凋亡的检测
        2.2.13 统计学处理
第3章 结果
    3.1 乳鼠心肌细胞的生长特点及免疫鉴定结果
    3.2 构建 PGC-FU-microRNA-21-GFP慢病毒表达载体并鉴定
    3.3 PGC-FU- microRNA-21-GFP慢病毒表达载体转染入心肌细胞的结果
    3.4 qRT-PCR法检测各组心肌细胞中 microRNA-21和PTEN mRNA的表达及Westernblot法检测PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表达
        3.4.1 qRT-PCR法检测各组心肌细胞中microRNA-21和PTEN mRNA的表达
        3.4.2 Westernblot法检测PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表达
    3.5 Hoechst33342/PI及Annexin V-FITC法检测各组心肌细胞凋亡率
        3.5.1 Annexin V-FITC法检测各组心肌细胞凋亡率
        3.5.2 Hoechst33342/PI法检测各组心肌细胞凋亡率
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3908234