鸡胚真皮间充质干/祖细胞分离培养与诱导分化研究

发布时间：2024-03-06 03:58

　　上世纪90年代,世界范围内开始了干细胞的研究,干细胞所具有的增殖与分化特性受到越来越多研究者的关注。干细胞的研究目前不仅包括分离培养与增殖,而且诱导分化的研究以及临床应用正越来受到重视。本实验以鸡真皮间充质干／祖细胞(Dermis-derived Mesenchymal Stem/progenitor Cells,DMS/PCs)为研究对象,建立了合适的体外培养体系,并进行了初步诱导分化方面的研究,取得了以下研究结果： 1、取16日龄鸡胚的皮肤组织,用0.25%DispaseⅡ37℃热消化1.5-2h,表皮层与真皮层分离,再用0.25%的胰酶消化15分钟用获得DMS/PCs,体外培养体系为：L-DMEM培养基,20ng/mL EGF,20ng/mL b EGF,2mM L-谷氨酰胺,1mM丙酮酸钠。 2、北京油鸡真皮间充质干／祖细胞在体外自我更新能力很强。体外培养时呈长梭形。原代培养时细胞较为混杂,有血细胞及成纤维细胞,经2-3次传代后细胞可被初步纯化。鸡真皮间充质干／祖细胞细胞的传代间隔时间约为72h,在体外培养时可传至16代。13代以内的细胞形态和增殖能力较为稳定,从第14代开始,...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2Fig.23种培养体系对细胞增殆能力的比较

2.3.2北京油鸡DMS/PCS培养体系的优化通过一记录3种培养体系细胞长满培养板所需的时间，计算每组时间的标准差和每两组之间的p值，得到了图2的柱状图。传代间隔时间10.008.00燕6·00袱4.002.000.00蘸2培养体系图2Fig.23种培养体系对细胞增殆能力....

图3传代后DMs/Pes形态(40X)Fig.3eellularmo印hologyofsubeulturedDMs/Pes(4oX)

细胞基本都为长梭形细胞，得到了初步的纯化，当传代至P14代后，细胞增殖能力减慢，并在细胞中出现了空泡化等现象，传代后发现有大量死亡细胞，不能够贴壁，共传至16代。不同代次的细胞形态如图3图3传代后DMs/Pes形态(40X)Fig.3eellularmo印hologyo....

图4冻存前和复苏后细胞形态A:冻存前细胞形态B:复苏后细胞形态

Fig4CellularmorphologyofbeforefreezingandAfierthawingA:CellularmorphologyofbeforefreezingB:Celhilarmorphologyofafterthawing从图4中可以看出，冻存前细....

图6.北京油鸡nMs用Cs表面标志的Rl:pCR检测eD29、CD44、cD7z、cD73Fig6R下PCRidentifieationofDMS/PCssurfaeemarkers，CD29、CD44、CD71、在P3和PS代均阳性表达CD73arePositiveinP3and

表面标志的Rl:pCR检测eD29、CD44、cD7z、cD73tionofDMS/PCssurfaeemarkers，CD29、CD44、CD71、在P3和PCD73arePPCs向脂肪细胞的诱导分化及鉴定肪诱导后1周，首先观察到大部分长梭形细胞逐渐浆里出现折光性很强的脂滴，在....

本文编号：3920517