组蛋白去甲基化酶抑制剂反苯环丙胺在调控Th1/Th2分化平衡中的作用及机制的初步探讨

发布时间：2024-03-09 04:07

　　目的观察组蛋白去甲基化酶抑制剂反苯环丙胺(tranylcypromine,TCP)对CD4+T细胞Th1/Th2分化的影响,分析赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(Lysine-specific demethylase1, LSD1)在其中的作用,探讨TCP在调控Th1/Th2分化平衡中的作用及机制。 方法1.收集并分离22例健康人外周血单核细胞,免疫磁珠法纯化CD4+T细胞,经抗CD3单抗联合抗CD28单抗刺激活化后,加入不同浓度TCP(10、30、50、80、100nM)作用,用CFSE法检测细胞增殖能力：Annexin/PI流式细胞术检测细胞凋亡率：CD4-PerCP-Cy5.5/IFN-γ-FITC/IL-4-PE三色流式细胞术检测细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4的表达情况；用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR (RQ-PCR)检测不同浓度TCP对CD4+T细胞IFN-γ、IL-4、T-bet mRNA表达的影响；ELISA检测IFN-γ的含量；Western blot观察T-bet、STAT1、pSTATl蛋白表达情况。向极化培养的Th1细胞和Th2细胞中...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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目录
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 课题来源、研究的目的和意义
    1.2 国内外研究概况
        1.2.1 国外研究概况
        1.2.2 国内研究概况
    1.3 论文的主要研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 研究资料及仪器设备
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 主要仪器与试剂
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要试剂的配置
    2.2 实验流程与方法
第三章 结果
    3.1 TCP对CD4⁺T细胞增殖的影响
        3.1.1 细胞分选后的纯度与活性
            3.1.1.1 流式细胞术检测分选前后的细胞纯度
            3.1.1.2 台盼蓝排斥试验检测分选前后的细胞活性
        3.1.2 CFSE试验检测TCP对CD4⁺T细胞增殖的影响
    3.2 TCP对CD4⁺T细胞凋亡的影响
    3.3 不同浓度TCP对Th1/Th2分化的影响
    3.4 TCP对CD4⁺T细胞IFN-γ、IL-4 mRNA表达的影响
    3.5 ELISA检测培养上清中IFN-γ的水平
    3.6 TCP对T-bet/STAT1信号转导通路的影响
        3.6.1 TCP对Thl型特异转录因子T-bet mRNA表达的影响
        3.6.2 TCP对T-bet、STAT1、pSTAT1蛋白表达的影响
        3.6.3 TCP对极化培养Th细胞的STAT1、pSTAT1表达的影响
    3.7 LSD1对Th细胞分化的影响
        3.7.1 TCP对LSD1作用的影响
        3.7.2 转染LSD1shRNA干扰LSD1的表达
        3.7.3 降低LSD1活性或干扰LSD1表达对Th1特异性细胞因子及转录调控子表达的影响
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
英文缩写词表
综述
    综述参考文献
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目
    A：在国内外刊物上发表的论文
    B：所参加的项目
致谢



本文编号：3922874