人羊膜间充质干细胞对淋巴细胞增殖的影响及致瘤性研究

发布时间：2017-05-26 03:12

  本文关键词：人羊膜间充质干细胞对淋巴细胞增殖的影响及致瘤性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本试验研究人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)在体内、外条件下对淋巴细胞增殖的影响,并将hAMSCs接种到免疫缺陷小鼠皮下后,观察hAMSCs致瘤情况,了解hAMSCs低免疫原性的可能机制,为干细胞临床治疗提供实验依据。试验通过双酶消化法即两次胰蛋白酶和一次Ⅰ型胶原酶共同消化分离hAMSCs,运用流式细胞术和免疫荧光的方法进行细胞学鉴定,确定获得的细胞为hAMSCs，采用CCK-8的方法测定淋巴细胞活细胞数目,ELISA测定细胞上清液中干扰素-γ(IFN-γ)的表达,研究体外条件下hAMSCs对刀豆素蛋白(ConA)引起异体淋巴细胞增殖和淋巴细胞分泌IFN-γ剂量的影响；将CCl4橄榄油混合液按体重比腹腔注射到小鼠体内造小鼠肝损伤模型后,小鼠尾静脉注射hAMSCs治疗肝损伤,测定小鼠3d、7d、14d、21d、30d外周血中淋巴细胞量和血浆中IFN-γ水平变化；分别将5×106hAMSCs、5×106和1×107肝癌细胞(HepG2)皮下注射于免疫缺陷小鼠背部,观察致瘤形成情况,50天后将肿瘤取出,HE染色进行组织学观察。研究结果显示,运用酶消化法分离培养hAMSCs,经鉴定、检测后,获得了纯度较高的hAMSCs。CCK-8法测定,5μg/mLConA能够引起淋巴细胞发生增殖,与hAMSCs共培养72h后,淋巴细胞活细胞数目较ConA刺激增殖组活细胞数目显著降低(P0.01),hAMSCs抑制效果明显。ELISA测定1×105个hAMSCs对淋巴细胞抑制72h的培养液中IFN-γ分泌情况,共培养组培养液中IFN-γ分泌量显著低于对照组(P0.01)。尾静脉注射hAMSCs肝损伤小鼠治疗后,与损伤组相比,治疗组小鼠淋巴细胞数量有降低趋势；治疗组小鼠体内血浆中IFN-γ含量随着hAMSCs注入时间的延长也显著降低(P0.01)。50d内hAMSCs组未见肿瘤形成,HepG2注射组均有瘤形成。测定注射hAMSCs组AFP、CEA指标,均为正常。
【关键词】：人羊膜间充质干细胞 肝癌细胞 淋巴细胞增殖 干扰素-γ 致瘤性
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-10
• 1 引言10-18
• 1.1 干细胞分类及意义10
• 1.2 间充质干细胞的研究进展10-17
• 1.2.1 MSC的来源及定义10-11
• 1.2.2 MSC免疫学特点11
• 1.2.3 MSC对可溶性因子的作用11-16
• 1.2.4 MSC优势治疗应用16-17
• 1.3 试验的背景及意义17-18
• 2 试验研究18-41
• 2.1 人羊膜间充质干细胞对体内外淋巴细胞增殖的影响18-35
• 2.1.1 材料来源18-19
• 2.1.2 主要试剂与仪器19
• 2.1.3 方法19-24
• 2.1.4 试验结果24-33
• 2.1.5 讨论33-34
• 2.1.6 小结34-35
• 2.2 人羊膜间充质干细胞致瘤性研究35-41
• 2.2.1 材料与方法35-36
• 2.2.2 试验结果36-40
• 2.2.3 讨论40-41
• 2.2.4 小结41
• 3 结论41-42
• 致谢42-43
• 参考文献43-49
• 作者简介49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：395635