CRISPR/Cas9介导的食蟹猴T细胞PD-1基因敲除的研究

发布时间：2024-05-18 06:30

　　[目的]为了选择一种理想的实验动物来作为T细胞免疫治疗模型,本文在初步分析人类、食蟹猴和猪CD3蛋白同源性的基础上,建立利用人源性CD3抗体诱导食蟹猴外周血T淋巴细胞的体外分离培养技术,并利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除食蟹猴T细胞PD-1基因,探讨PD-1基因敲除对T细胞的影响,以期建立利用CRISPR/Cas9靶向T细胞PD-1进行肿瘤细胞免疫治疗的策略,进而为T细胞免疫治疗方面的研究和应用提供实验依据。[方法]从NCBI查询获取人类、食蟹猴和猪CD3蛋白各自的氨基酸序列,并用DNAMAN软件进行序列比对、同源性分析和构建系统进化树。Western blotting检测三种T细胞膜上CD3蛋白的表达水平。分离健康食蟹猴PBMC,分为3组,A组加入人源性CD3抗体单刺激、B组加入人重组IL-2单刺激、C组加入人源性CD3抗体和人重组IL-2共刺激。倒置显微镜下观察细胞生长状态并计数,绘制细胞生长曲线,台盼蓝染色检测细胞活性,流式细胞术检测T细胞表面标志物CD3、CD4、CD8的表达。CRISPR/Cas9介导的食蟹猴T细胞PD-1基因的敲除:(1)质粒构建:利用gRNA在线...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 人源性CD3抗体诱导食蟹猴T淋巴细胞培养方法的建立
    材料与方法
    结果
    讨论
    本部分结论
第二部分 CRISPR/Cas9介导的PD-1基因敲除对食蟹猴T细胞的影响
    材料与方法
    结果
    讨论
    本部分结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间获得的学术成果
致谢



本文编号：3976581