艰难梭菌毒素A原核表达及重组蛋白纯化

发布时间：2017-05-27 01:05

  本文关键词：艰难梭菌毒素A原核表达及重组蛋白纯化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建艰难梭菌(Clostridium difficile,C.difficile)毒素A羧基末端原核表达载体,优化诱导表达条件及纯化重组蛋白。方法利用聚合酶链式反应扩增C.difficile毒素A羧基末端基因序列,并将此序列转入pET-28b载体,构建pET-28b-tcdA重组表达载体,并将表达载体转化到BL21(DE3)感受态大肠埃希菌细胞中,分别在不同条件下进行诱导表达,获得最佳诱导表达条件后进行大量表达,最后用Ni柱对重组蛋白进行亲和纯化,得到纯化后的重组蛋白。结果成功构建了pET-28b-tcdA重组表达载体,其重组蛋白表达最佳诱导条件:菌液吸光度值取0.6、温度取25℃、IPTG终浓度取1.0mmol/L、诱导时间取10h。蛋白纯化咪唑磷酸盐洗脱液最佳浓度取200mmol/L。结论成功构建pET-28b-tcdA重组表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)中可以有效表达,并获得高浓度重组蛋白,为进一步制备TcdA适配子奠定了一定实验室基础。
【作者单位】： 广州医科大学金域检验学院;
【关键词】： 艰难梭菌毒素A 原核表达 重组蛋白纯化
【基金】：广州市科技计划项目书(201510010241)
【分类号】：R378.8
【正文快照】： 艰难梭菌(Clostridium difficile,C.diffi-cile)产生的毒素A和B是其引起艰难梭菌相关感染(Clostridium difficile-associated infection,CDI)的物质基础,两种毒素分别由位于C.dif-ficile致病性决定区的两个染色体基因tcdA与tcdB编码[1],这两种毒素均是单葡萄糖转移酶,有着相似

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本文编号：398489