慢病毒介导的NGF基因沉默对PC12细胞分化的影响

发布时间：2017-05-27 21:03

  本文关键词：慢病毒介导的NGF基因沉默对PC12细胞分化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨慢病毒介导的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因沉默后对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)分化的影响及其机制。方法构建NGF shRNA慢病毒载体。培养PC12细胞,随机分为5组(n=3):1正常对照组(NC):PC12细胞置于DMEM/HG细胞培养液和促感染试剂polybrene中培养;2空病毒感染组(LV CON):PC12细胞置于空病毒和polybrene中培养;3慢病毒NGF shRNA1感染组(LV sh NGF1):PC12细胞置于慢病毒NGF shRNA1和polybrene中培养;4慢病毒NGF shRNA2感染组(LV sh NGF2):PC12细胞置于慢病毒NGF shRNA2和polybrene中培养;5慢病毒NGF shRNA3感染组(LV sh NGF3):PC12细胞置于慢病毒NGF shRN3和polybrene中培养。处理结束后,荧光显微镜下检测感染效率、荧光定量RT-PCR法检测细胞NGF mRNA表达水平、Western blot法检测慢病毒感染后细胞NGF、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)和磷酸化-ERK1/2(phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)蛋白表达,细胞增殖检验试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活性,显微镜下观察PC12细胞形态,统计细胞突起长度和最大细胞直径。结果慢病毒感染PC12细胞的效率超过90%。与NC组相比,LV sh NGF3组NGF mRNA表达降低(P0.05),NGF蛋白水平明显降低(P0.05),ERK1/2蛋白表达和细胞活性无差异,p-ERK1/2蛋白表达有明显下降(P0.01),细胞形态发生明显变化,细胞突起长度和最大细胞直径均变小(P0.01),细胞分化被抑制。结论慢病毒介导的NGF基因沉默通过抑制ERK1/2活化,影响PC12细胞分化。
【作者单位】： 安徽医科大学第二附属医院麻醉科;
【关键词】： 慢病毒 NGF 基因沉默 PC细胞 分化 ERK/
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No 81471145)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子家族中重要一员,其在感觉神经和交感神经的生长发育中发挥着至关重要的作用[1]。大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)是大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株,由于其可在NGF诱导下向交感神经元样细胞分化,目前广泛用于神

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本文编号：401177