大鼠骨髓间充质干细胞条件培养基通过ERK1/2促进肌腱细胞增殖

发布时间：2024-12-11 06:12

　　间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类非造血干细胞,不仅来源广泛而且具有一定的可塑性以及可以诱导分化为不同类型的细胞,如成骨细胞和基质细胞等。MSCs通过分化参与组织损伤修复的能力使其成为临床上最具应用前景的干细胞类型之一。近年来随着研究的深入,人们发现,MSCs不仅可以通过定向分化替代受损组织,而且还可以通过旁分泌作用参与损伤修复。肌腱损伤是临床常见的疾病之一。基于干细胞的肌腱损伤修复研究表明,多种因素可以诱导干细胞向肌腱细胞定向分化,包括细胞因子、力学拉伸、共培养环境等。但是,虽然有报道表明MSCs旁分泌可促进多种组织的损伤修复,但MSCs旁分泌作用是否参与肌腱损伤修复目前还未有报道。本文的主要研究目的是探究大鼠骨髓MSCs条件培养基(conditioned medium from rat bone marrow derived mesenchymal stem cells,r MSCs-CM)对大鼠肌腱细胞增殖的影响以及信号分子ERK1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)在...

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【学位级别】：硕士

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英文摘要
1 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 肌腱损伤病理学以及治疗手段的限制
        1.1.2 骨髓间充质干细胞的生物学特性
        1.1.3 MSCs旁分泌的提出
    1.2 国内外研究现状
        1.2.1 MSCs旁分泌因子影响细胞生物学行为的研究
        1.2.2 MSCs参与肌腱损伤修复的研究
    1.3 研究内容
        1.3.1 课题研究的主要内容
        1.3.2 研究目标
    1.4 实验设计
    1.5 研究方法
        1.5.1 研究方法
    1.6 本课题的特色和创新之处
2 rMSCs和肌腱细胞的原代培养及鉴定
    2.1 引言
    2.2 实验器材与试剂
        2.2.1 实验仪器、材料、设备
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 主要试剂配制
    2.3 实验方法和步骤
        2.3.1 r MSCs的原代培养及传代培养
        2.3.2 检测r MSCs原代细胞表面抗原
        2.3.3 肌腱细胞的原代培养及传代培养
    2.4 实验结果
        2.4.1 r MSCs的形态观察
        2.4.2 r MSCs表面抗原鉴定
        2.4.3 肌腱细胞的形态观察
    2.5 讨论
    2.6 本章小结
3 rMSC-CM促进肌腱细胞增殖及其分子机理
    3.1 引言
    3.2 实验器材与试剂、设备
        3.2.1 实验仪器与材料
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 主要试剂配制
    3.3 实验方法与步骤
        3.3.1 r MSCs-CM的收集
        3.3.2 细胞计数法检测r MSCs-CM对肌腱细胞的增殖
        3.3.3 流式细胞术检测肌腱细胞的细胞周期
        3.3.4 Western blot技术检测肌腱细胞中ERK1/2 激活情况
    3.4 实验结果
        3.4.1 r MSCs-CM对肌腱细胞增殖的影响
        3.4.2 r MSC-CM对肌腱细胞的细胞周期影响
        3.4.3 r MSC-CM激活ERK1/2 信号蛋白
        3.4.4 PD98059 对r MSCs-CM激活ERK1/2 的抑制情况
        3.4.5 PD98059 对r MSCs-CM促肌腱细胞增殖的影响
        3.4.6 PD98059 对肌腱细胞的细胞周期影响
    3.5 讨论
    3.6 本章小结
4 结果与展望
    4.1 主要结论
    4.2 后续研究工作的展望
致谢
参考文献
附录：A. 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录



本文编号：4016313