糖尿病小鼠血清外泌体在H9C2心肌细胞损伤调控中的作用及机制

发布时间：2024-12-21 22:46

　　 目的探讨糖尿病小鼠(db/db)血清外泌体在体外培养的H9C2心肌细胞损伤中的作用及机制。方法采用db/db小鼠(n=10)及其对照组小鼠(db/+,n=5)制备糖尿病心肌损伤小鼠模型。提取小鼠血清中的外泌体,定量检测其数量并应用PKH26标记为红色荧光;采用Western blotting检测外泌体相关蛋白及外泌体刺激后H9C2细胞炎性因子的表达情况;采用TUNEL检测细胞凋亡情况;采用Rab1a中和抗体进行阻断实验。结果 db/db小鼠血清外泌体数量(30.95×109/ml)明显多于db/+小鼠(10.45×109/ml),差异有统计学意义(P<0.01)。体外培养的H9C2细胞能够内吞更多db/db小鼠血清来源的外泌体;应用db/db小鼠血清外泌体干预H9C2细胞可以刺激细胞炎性因子表达明显增加,其中IL-6和IL-1β分别增加6.2倍和2.6倍(P<0.01),且H9C2细胞凋亡明显增多。进一步机制研究发现,Rab1a在db/db小鼠血清外泌体中的表达明显增多,应用Rab1a中和抗体阻断db/db小鼠外泌体中Rab1a表达后可明显抑制H9C2细胞对外泌体的内吞及细...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 血清外泌体的分离
    1.3 外泌体的定量检测
    1.4 外泌体标记分析
    1.5 细胞系及细胞培养
    1.6 中和抗体处理
    1.7 外泌体内吞情况检测
    1.8 TUNEL法检测细胞凋亡情况
    1.9 We s t e r n b l o t t i n g检测外泌体、炎症因子及凋亡相关蛋白的表达
    1.1 0 统计学处理
2 结果
    2.1 db/db糖尿病小鼠外泌体的分泌情况
    2.2 H9C2细胞对db/db小鼠外泌体的内吞作用
    2.3 外泌体诱导H9C2细胞炎性因子表达及细胞凋亡情况
    2.4 内吞调控相关蛋白的表达
    2.5 Rab1a中和抗体对db/db小鼠血清外泌体内吞及H9C2细胞凋亡的抑制作用
3 讨论



本文编号：4019024