人类精子获能的磷酸化蛋白质组学研究

发布时间：2025-01-07 03:56

　　Austin(1951)和Chang(1951)分别报道,家兔精子进入雌性生殖道,与卵子结合形成受精卵之前,获得使精子受孕的能力,称之为‘获能’。获能后的精子发生超激活运动、质膜胆固醇含量减少、酪氨酸磷酸化增强和引发顶体反应等,并且大量研究表明酪氨酸磷酸化对于精子的获能尤为重要,但是其完整的分子机制和信号通路始终不是很清楚。本课题旨在发现人类精子获能过程中新的发生磷酸化修饰改变的蛋白,以及关键酪氨酸磷酸化激酶,并进行其功能性研究,为临床相关疾病提供诊断和治疗的候选分子靶标。为了全面的发现精子获能过程中哪些蛋白质发生了磷酸化修饰的改变,我们运用IMAC-TiO2磷酸肽双富集和LTQ Orbitrap Velos质谱仪相结合的非标记定量策略,构建了正常人类精子获能前后(体外获能培养Oh、2h)磷酸化修饰差异谱,共鉴定3350个磷酸化肽段,1017个磷酸化蛋白。t检验统计,获能后磷酸化水平升高2倍以上的磷酸化蛋白有99个,获能后磷酸化水平下降2倍以上的磷酸化蛋白有11个,获能后磷酸化水平升高2倍以上的酪氨酸磷酸化蛋白有18个,获能后磷酸化水平下降2倍以上的酪氨酸磷酸化蛋白仅有1个。此外,对磷酸...

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１；?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ确定了获能前精子和获能后精子（获能１小时、２小时和３??

获能比的精子与获能前的精子相比酪氨酸礎酸化水平几乎没有变化，获??能化的精子的酪氨酸憐酸化水平明显增强，获能３ｈ的精子与获能２ｈ相比酪氨??酸礎酸化水平有所下降，但仍然高于获能前的精子（图１）。??Ｈｏｕｒｓ?ａｆｔｅｒ?ｃａｐａｄｔａ巧ｏｎ??ＭＷ（ｋＤａ）?Ｐｒｅ?１?２?３....

图２．１：人类精子获能前后磯酸化差异修饰谱系构建的策略图

?南京佐科大学巧±学位论文??２、无标记定量策略的应用Ｗ及质谱鉴定结果??基于Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ的实验结果，我们收集了获能前和获能化的精子标本，两??沮标本处理后进行无标记定量，稱酸化富集后质谱鉴定，实验重复Ｓ次（图??２．１）。??

图２．２；差异修饰憐酸化蛋白的表达分布图

化修饰差异谱系，共鉴定出３３５０个稱酸化位点，１０１７个憐酸化蛋白。＾检验统??计显示，获能后憐酸化水平升高２倍＾文上的稱酸化蛋白有９９个，获能后憐酸化??水平下降２倍Ｗ上的憐酸化蛋白有１１个（ｐ＜０．０５）（图２．２）；获能后憐酸化水平升??高２倍Ｗ上的酪氨酸憐酸化蛋白有１８个....

图２．３：差异修饰酪氨酸憐酸化蛋白的表达分布图

化修饰差异谱系，共鉴定出３３５０个稱酸化位点，１０１７个憐酸化蛋白。＾检验统??计显示，获能后憐酸化水平升高２倍＾文上的稱酸化蛋白有９９个，获能后憐酸化??水平下降２倍Ｗ上的憐酸化蛋白有１１个（ｐ＜０．０５）（图２．２）；获能后憐酸化水平升??高２倍Ｗ上的酪氨酸憐酸化蛋白有１８个....

本文编号：4024461