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EMA-qPCR检测活沙门菌方法研究

发布时间:2025-01-14 18:36
   目的为解决荧光定量PCR(qPCR)方法不能区分死菌和活菌的问题,探索一种快速定量检测"活的"沙门菌的技术路线。方法将不同浓度叠氮溴化乙锭(EMA)作用于不同浓度的死/活沙门菌后,用qPCR检测沙门菌Ct值,确定EMA的最优使用浓度。在混合菌量为10~6、10~5、10~4、10~3CFU/mL,活菌比例为0%、10%、30%、50%、70%、100%条件下,确定EMA处理过的活菌+死菌,未加EMA的活菌+死菌,未加EMA的活菌+生理盐水三组菌的Ct值,研究EMA-qPCR法对死/活沙门菌的区分能力。结果 EMA浓度低于50μg/mL,EMA处理活菌组与EMA未处理活菌组的Ct值差异无统计学意义。综合考虑,EMA最优使用浓度为10μg/mL。采用10μg/mL EMA进行预处理,混合菌量为10~6、10~5、10~4、10~3CFU/mL时得出的结果一致:活菌比例为0%,≤50%,>50%时,EMA处理过的活菌+死菌与未加EMA的活菌+死菌两组Ct值差异(ΔCt)分别为≥5,≥1,<1。同时,除活菌比例0%外,其他活菌浓度下,EMA处理过的活菌+死菌与未加EMA的活菌+生理...

【文章页数】:4 页

【文章目录】:
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验菌株
        1.1.2 试剂和仪器
        1.1.3 引物和探针
    1.2 方法
        1.2.1 优化EMA使用浓度
            1.2.1. 1 沙门菌活菌、死菌的制备
            1.2.1.2 EMA处理与DNA提取
            1.2.1. 3 荧光定量PCR反应条件
        1.2.2 EMA-qPCR检测沙门菌的死/活混合物
2 结果
    2.1 EMA最优浓度
    2.2 EMA-qPCR检测纯培养的沙门菌死/活混合物
3 讨论



本文编号:4027020

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