基于中和表位的GⅡ.4型重组诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒抗原含量检测方法的建立及验证

发布时间：2025-01-17 14:38

　　 目的建立基于中和表位的GⅡ. 4型重组诺如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗原含量检测方法,并进行验证,以用于重组NoV疫苗质量控制。方法应用ELISA和HBGA-VLP阻断试验筛选中和性单克隆抗体,并筛选配对抗体,分别作为包被抗体和检测抗体,建立GⅡ. 4型重组NoV VP1蛋白VLP双抗夹心ELISA抗原定量检测方法。确定方法的线性检测范围,并对方法的专属性、准确性和精密性进行验证。结果27株GⅡ. 4 VLP特异性ELISA检测阳性的杂交瘤细胞克隆中,有12株GⅡ. 4型阻断抗体检测呈阳性,选择具有GⅡ. 4型阻断活性的特异性单抗2H7-C5和2E6-B3作为双抗夹心抗体对,用于建立GⅡ. 4型重组NoV VP1蛋白VLP双抗夹心ELISA抗原定量检测方法。该方法的线性测定范围为15. 63～250 ng/mL,标准曲线R2均> 0. 98;准确性验证的加标回收率在72. 23%～134. 03%之间;重复性验证的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为7. 06...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒及细胞
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 中和性单抗的筛选
        1.3.1 VLP特异性ELISA
        1.3.2 HBGA-VLP阻断试验
    1.4 中和性单抗配对抗体的筛选
    1.5 检测方法的建立
    1.6 线性及测定范围的确定
    1.7 方法的验证
        1.7.1 专属性
        1.7.2 准确性
        1.7.3 精密性
            1.7.3. 1 重复性
            1.7.3. 2 中间精密性
2 结果
    2.1 中和性单抗的筛选
    2.2 中和性单抗配对抗体的筛选
    2.3 标准曲线的线性及测定范围
    2.4 方法的验证
        2.4.1 专属性
        2.4.2 准确性
        2.4.3 精密性
            2.4.3. 1 重复性
            2.4.3. 2 中间精密性
3 讨论



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