PDGF-BB介导的PI3K信号通路在BMSCs促进AD细胞模型损伤修复中的机制研究

发布时间：2025-01-18 12:33

　　[目的]本实验室在之前骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植治疗阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠模型中发现,BMSCs可以改善AD大鼠的学习记忆能力,并且在治疗后的大鼠海马组织中发现了 血小板衍生生长因子-BB(Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)表达显著升高。本研究将通过体外细胞实验进一步阐明PDGF-BB在BMSCs治疗AD中的作用机制。[方法]首先以HIV慢病毒为载体构建APP695过表达的慢病毒重组体对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)进行转染,然后用嘌呤霉素筛选稳转细胞株,构建AD的体外细胞模型即APP695过表达的SH-SY5Y细胞(后简称SH-SY5Y-APP695)。BMSCs与SH-SY5Y-APP695通过细胞培养小室进行非接触式共培养72h后,通过倒置相差显微镜观察共培养后SH-SY5Y-APP695的形态变化,并通过免疫荧光染色检测神经细胞的标志物TuJ1的表达情况。采用ELISA检测SH-SY5Y-APP695中A β...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２?ＢＭＳＣｓ的细胞形态及免疫荧光鉴定??图注：（Ａ）Ｐ３代ＢＭＳＣｓ?ｌ－３ｄ的细胞形态

１．?ＢＭＳＣｓ的形态及免疫荧光鉴定??ＢＭＳＣｓ接种到培养瓶后，细胞呈圆形，大小不一，２４ｈ后开始贴壁，细胞呈??圆形，梭形或多角形（图２Ａ）。??为了鉴定ＢＭＳＣｓ的纯度，用免疫荧光染色对ＢＭＳＣｓ的细胞表面标志物进行检??测，结果显示ＣＤ４５阳性率为２．?０％，ＣＤ３４阳性....

图４?ＡＰＰ６９５?ＯＲＦ质粒结构及ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５载体构建??图注：（Ａ）?ＯＲＦＡＰＰ６９５质粒的结构，载体是ｐ－Ｒｅｃｅｉｖｅｒ－Ｍ９８

图５?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ－ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５稳转细胞株细胞活力检测??图注：（Ａ）?ｓｈａｍ、ＮＣ和ＡＰＰ过表达组细胞ｌ－３ｄ的细胞明场图片

转染ＨＩＶ－ＧＦＰ和ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５?ＯＲＦ后用２?Ｕ?ｇ／ｍｌ的嘌呤霉素进行筛选，后正??常传代培养。活细胞显微镜观察ｓｈａｍ，?ＮＣ?（转染ＨＩＶ），ＡＰＰ６９５?（转染ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５??ＯＲＦ）（图５Ａ），并用ＭＴＴ检测三组细胞的细胞活力，ＭＴＴ结果显示ｓｈａｍ组....

图６?ＡＰＰ６９５过表达对ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞形态和Ａ?ｅ?１－４２表达的影响??图注：（Ａ）?ｓｈａｍ、ＮＣ及ＡＰＰ三组细胞的ＴＵｊｌ表达情况，蓝色为ＤＡＰＩ染色，绿色??ＧＦＰ荧光色，红色Ｔｕｌ细；（Ｂ－Ｃ）?ｓｈａｍ、ＮＣＡＰＰ三组细的ＡＰＰ??

本文编号：4028618