LV-calb2和LV-siRNA-calb2慢病毒载体的构建及其在睾丸间质细胞的表达

发布时间：2017-05-28 21:06

  本文关键词：LV-calb2和LV-siRNA-calb2慢病毒载体的构建及其在睾丸间质细胞的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:构建钙视网膜蛋白(CALB2)基因超表达及小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体,观察CALB2对睾丸间质细胞雄激素合成的调节作用。方法:合成超表达及干涉的质粒,转入制备好的细菌感受态细胞,聚合酶链反应(PCR)鉴定阳性重组子后测序验证,确认构建成功的超表达及干涉慢病毒载体。用上述慢病毒载体分别感染MLTC-1及R2C间质细胞,观察感染效率,而后用放射免疫法检测睾酮和孕酮的合成。结果:PCR和基因测序证实LV-calb2和LV-si RNA-calb2慢病毒载体构建成功,并可高效感染MLTC-1及R2C细胞。超表达CALB2后,MLTC-1细胞睾酮生成显著增加(P0.001);干涉CALB2表达后,R2C间质细胞孕酮生成显著减少(P0.05)。结论:成功构建了calb2基因超表达及干涉慢病毒载体,并可体外转染睾丸间质细胞系。初步结果表明,CALB2可促进间质细胞类固醇激素生成。
【作者单位】： 南京医科大学第一附属医院生殖医学科;
【关键词】： 钙结合蛋白 维生素D依赖性 慢病毒属 睾丸 莱迪希细胞 雄激素类
【基金】：国家自然科学基金(81170559,81370754,31301182) 江苏省卫生厅项目(ZX201110) 江苏省妇幼保健重点学科(FXK201221)
【分类号】：R339.2
【正文快照】： 睾丸间质细胞合成和分泌雄激素主要受下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamus-pituitary-gonadaxis,HPG轴)调控,间质细胞膜上的黄体生成激素(LH)受体(LHR)介导垂体分泌的LH作用。越来越多的证据表明,雄激素合成还受到睾丸内的局部调节——即通过睾丸内的旁分泌及自分泌途径调节雄激

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