问号钩端螺旋体colA基因产物胶原酶活性及其致病机制研究

发布时间：2017-05-28 21:10

  本文关键词：问号钩端螺旋体colA基因产物胶原酶活性及其致病机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的了解不同问号钩端螺旋体(简称钩体)血清群colA基因分布和序列保守性、表达产物胶原酶活性以及感染细胞时colA基因表达水平变化和产物分泌情况。方法采用PCR及其产物测序法检测我国主要流行的7个问号钩体血清群代表株中colA基因并了解其序列保守性。构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株colA基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提取表达的目的重组蛋白rColA。采用分光光度法检测rColA水解I~IV型天然胶原蛋白及Azocoll和Pz-肽合成底物能力并测定其Km和Kcat值。采用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot分别检测问号钩体赖株感染HUVEC、BEAS-2B、L-02、HEK293细胞时colA-mRNA水平变化及ColA分泌情况。结果不同血清群问号钩体均能扩增出全长colA基因片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性高达99.4%~100%。所构建的colA基因表达系统能有效表达rColA。rColA能不同程度地水解上述6种底物,但水解III型胶原蛋白能力最强(P0.05),其Km和Kcat值分别为2.16mg/mL和35.6h-1。问号钩体赖株感染各靶细胞时colA-mRNA水平显著升高(P0.01),问号钩体-细胞共培养物上清中可检出ColA。结论问号钩体colA基因为序列保守、分布广泛的胶原酶编码基因,感染细胞时该基因产物表达上调并外分泌,从而在问号钩体感染宿主过程中发挥实际作用。
【作者单位】： 浙江中医药大学附属第一医院检验科;浙江大学医学院病原生物学系;
【关键词】： 问号钩端螺旋体 colA基因 胶原酶 表达 分泌
【基金】：国家自然科学基金(81261160321和81171534) 浙江省自然科学基金(LQ14H190001)~~
【分类号】：R377.5
【正文快照】： 致病性钩端螺旋体(简称钩体)感染引起的钩体病是全球流行的人兽共患传染病[1]。致病性钩体有7个基因种(genospecies),但以问号钩体(Leptospi-ra interrogans)流行最广[1-3]。动物感染问号钩体后症状轻微,但可持续从尿液排出钩体污染水源和土壤,人接触疫水或疫土后均发病[3-4]

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本文编号：403473